茶多酚与茶碱联合使用对小鼠酒精代谢影响的初步探讨技术分析.doc

机能实验设计 实验设计名称 ： 茶多酚与茶碱联合使用 对小鼠酒精代谢影响的初步探讨 实验设计成员： 系（部）： 湘雅医学院临床五年制 班级： 临五1303班 联系电话： 研究背景与设计思想 近几年，随着茶文化的流行，人们在酒过三巡，意犹未尽之时，便会相约一起品茶，不仅是对茶道的继承，自身的修炼，更是因为，现代许多中西医学者和茶叶专家,都从不同角度阐述了茶能解酒毒[1]。我们对此很好奇，茶中，是哪些成分能够解酒？该种成分又是如何解酒的？ 资料显示，酒精在人体中，90%以上是在肝脏中代谢[1]，因此长期大量饮酒，会加重肝脏的负担，引起一系列的疾病。茶中含有茶多酚，是一类多轻基酚类化合物的混合物,简称茶多酚,易溶于热水、乙醇、乙酸乙酷。茶多酚消除体内过量的自由基,避免生物学大分子的损伤[2]，并能抑制细胞色素P450参与亲电子代谢物的形成,参与辅酶n的电子传递链来终止自由基的反应[3],此外,茶多酚可诱导或提高体内抗氧化酶系如SOD和GSH一PX等的活性来协同消除体内过量的有害自由基[4]。茶多酚能阻止自由基对肝细胞膜中不饱和脂肪酸的氧化损伤,以此缓解酒精对肝脏的损害，预防酒精毒性作用，达到一定的醒酒目的。 茶中还有一有效成分，茶碱，是甲基嘌呤类药物。茶碱可以增加心排出量，增加肾小球滤过率和肾血流量，有利尿功能[5]。酒精在体内的代谢产物需通过肾脏排出体外，茶碱可以预防酒精毒性作用并且醒酒，而茶多酚可以加速酒精的分解代谢，那么，二者同时在茶中，是否有协同作用？我们设计实验，配制茶多酚和茶碱的复合物，将其与茶多酚与茶碱单独作用做比较，看二者同时在体内，与其单独作用，是否有差别。 另外，关于茶多酚碎玉酒精代谢的作用，我们在查找相关文章时，看到了一个矛盾之处，有文章说：“多酚作为抗氧化剂,可抑制乙醇氧化为乙醛[6]”又一篇学位论文提到：“茶多酚在代谢过程中，可能能使肝中ADH的活性增加[7]”，ADH是肝中的一类美文，可催化醇类氧化成醛。茶多酚可以增加ADH活性，也就是说茶多酚有助于乙醇氧化，那为何茶多酚又具有抗氧化作用，抑制乙醇氧化为乙醛？为了解答我们的疑问，我们将在实验中，测量肝脏中ADH酶的活性，以做证明。 研究目的和主要研究内容 我们希望通过本次实验，知道茶多酚与茶碱对于ADH酶活性的作用，以及二者复合使用，能否达到更加好的解酒效果，即能既不损害肝脏，又能加速酒精排出体外。我们通过对照实验达到目的，将一定数量且品种相同且健康的实验动物分成四组，A组灌入茶多酚与茶碱的复合试剂，B组灌入茶多酚制剂，C组灌入茶碱制剂，D组为空白对照组，灌入制剂后一段时间，再灌入相同量的酒精，隔一段时间观察四组小鼠的体态特征，测量其尿量，血醛，血醇等指标，再将四组小鼠肝脏取出，测量其肝脏的ADH酶活性，得出数据，总结结论。 研究方案与技术路线 （二）实验设计 1、实验动物设计 我们选用SPFA级小鼠作为实验动物，有以下几点理由： 1）、小鼠温驯、容易饲养、繁殖率高，适用于动物需求量大的实验，常用于药物筛选实验、药代动力学，在科研工作中被广泛利用。 2）、SPFA级别小鼠仅带有已知的非病原微生物，对操作者威胁较少，且价格较便宜，易得，有利于控制成本。 3）、肝和血量相对较大，易于得到样品，能在称重过程中减少实验误差。 2、实验专业设计 选用小鼠作为实验动物，用灌胃针给予茶多酚或茶碱或两者的混合剂，观察小鼠的醉酒指标：运动能力，对刺激的反应，精神状况等，观察小鼠的排尿，检测血醇，血醛，肝中的ADH,ALDH活性等指标。 3、实验统计设计 实验统计设计中应始终贯彻随机、对照、重复三大原则。 （1）随机：选正常成年健康重相近的雄性小鼠40只（视情况可增大样本总量），将40只小鼠随机编号成A1-A10,B1-B10,C1-C10 ,D1-D10.称重并记录。 （2）对照：本组实验做了空白对照和实验对照。 （3）重复：本实验采用的是每实验小组有10只小鼠，具有一定的重复性。 （4）数据收集：本实验搜集计量资料，初步确定对各组实验数据的比较分为实验值和基础值比较。 表1四组小鼠相关指标测定 编号 项目 体重(KG) 血醇（mg/ml） 血醛（mg/ml） ADH(U/L) ALDH(U/L) A 1 ... 10 总体均值 B C D （总体均值=样本均值±标准差；方差P） 表　组动物 组别A B C D 注：前三个各指标均以空白对照组为基准分为+，++，+++，++++四个等级，且空白对照组全为