3.自考2012.4.docVIP

现代生物制药技术 第第一章 基因工程 1、现代生物制药技术： 是利用微生物或哺乳动物细胞等生物体系，采用先进的生物学和工程学技术，有目的、有计划、定向地加工制造药品的一个新兴技术。（P1） 2、现代生物制药技术的构成：基因工程、发酵工程、细胞工程、酶工程（P1） 3、目的基因的三大要素： （1）、如何获得目的基因： ①PCR法 ②化学合成法—不能合成长的基因（选择） ③构建基因文库法 （2）、载体—质粒： 质粒是指在细胞内寄生和复制子。质粒的定义是在细菌细胞内作为与宿主染色体有别的复制子而进行复制并且在细胞分裂时能恒定地传递给子代细胞的独立遗传因子。（P8） （3）、酶：核酸限制性内切酶、DNA连接酶、DNA聚合酶 4、基因工程： 是指在体外将核酸分子插入病毒、质粒或者它载体分子，构成遗传物质的新组合，并使之参入到原先没有这类分子的寄主细胞内，而能持续稳定地繁殖，并通过工程化为人类提供有用产品及服务的技术。（P5） 5、基因工程的目的： （1）、特定基因产品的表达：基因工程药物 （2）、动植物的性状改良： ①转基因植物：抗除草剂转基因植物、抗虫基因植物、抗病基因植物、抗逆境基因植物、品质改良基因植物、代谢修饰的转基因植物、生产药物的转基因植物 ②转基因动物：采用基因工程技术将外源目的基因导入的动物生殖细胞、胚胎干细胞和早起胚胎，并在受体动物的染色体上稳定整合，又经过各种发育途径，能把外源目的基因稳定地传给子代，所获得的动物。 6、细胞因子定义：细胞因子是人类或动物的各类细胞分泌的具有多种生物活性的因子。（P205） 7、细胞因子的特征： （1）、来源的多源性 （2）、多效性 （3）、高效性 、快速反应性 （5）、理化性质 第二章 发酵工程（微生物工程） 1、微生物工程定义：在应用微生物中，把所有通过微生物培养而生产的对人类有益的产品或提供服务的技术称为微生物工程，也称为发酵工程。（P37） 2、微生物主要有：细菌、放线菌、霉菌、酵母菌、大型菌、病菌等（P37） 3、微生物的培养——培养基的组成：（P43-46） （1）、碳源 （2）、氮源 （3）、无机盐和微量元素 （4）、水 （5）、生长因子：生长因子是指某些微生物在生命过程中必须从外界环境中摄取的某些微量的有机化合物，如维生素、氨基酸和碱基等。 4、微生物发酵法生产酶的优点： （1）、微生物种类繁多，所生产的酶的品种齐全 （2）、微生物生产繁殖快，生产周期短，因而酶的产量高 （3）、生产成本低 （4）、由于微生物具有较强的适应性和应变能力，可以通过筛选，诱变等方法培养出高产菌种 第三章 酶工程 1、酶的概念：酶是生物体产生的具有催化活动的蛋白质，也称为生物催化剂。（P159） 2、酶的化学性质——蛋白质 （1）、酶是两性电解质，在等电点易沉淀 （2）、导致蛋白质变性的因素都能使酶变性 （3）、能被蛋白酶水解而失活 3、酶工程的概念：酶工程是应用酶的特异性催化功能并通过工程化为人类提供有用产品，提供有益服务的技术。酶工程的主要内容包括：酶的发酵生产，酶的 分子修饰，酶和细胞固定化、酶反应器等。（P159） 4、酶的分离纯化： （1）、原材料的选择和预处理 （2）、酶的分离 （3）、酶的精制 （4）、酶的浓缩干爆及结晶 注意事项： （1）、全部操作一般在低温（0-4℃）进行 （2）、在分离提纯过程中，不能剧烈搅拌 （3）、在提纯溶剂中，经常要加一些保护剂 （4）、在分离提纯过程中，要不断地测定蛋白质浓度和酶活力，以对纯化过程进行监测。 5、常用的酶分离纯化方法： 分离原理 分离方法分子极性与溶解度等电点沉淀，有机溶剂沉淀盐析等分子大小凝胶过滤，膜分离，离心等离子交换电荷性质层析，等离子聚焦，电泳等疏水作用疏水层析、相反色谱等生物亲和性亲和色谱，免疫吸附层析等 6、酶的特性：（1）、催化效率高（2）、专一性强 （3）、反应条件温和 （4）、酶的活性是可调节控制的 7、酶的固定化：将酶与水不溶性的载体结合，制备固定化酶的过程称为酶的固定化。（P165） 8、酶的不足之处： （1）、酶的稳定性较差 （2）、酶一般都是在水溶液中与底物反应，难于回收利用 （3）、酶反应后杂质与产物混在一起，给进一步的分离纯带来一定困难 9、酶固定化方法： （1）、载体结合法：物理吸附法、离子结合法、共价结合法 （P167-170） （2）、交联法 （3）、包埋法 （4）、新型的酶固定化方法：a、光偶联法b、偶合固定法c、无载体固定化酶 10、