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Chromatography 一、概述 色谱法实质：分离、分析 色谱分离过程： 色谱法优点： 同时分析 分离性能好 灵敏度高（ppm-ppb 微克-纳克） 进样量小 （1-100μL） 二、色谱图 三、气相色谱法与高效液相色谱法 (一) 气相色谱法 2. 气相色谱固定相及选择 在化学惰性的固体微粒(用来支撑固定液的，称为载体) 表面，涂上一层高沸点有机化合物的液膜（固定液） 各组分的分离是基于各组分在固定相中吸附能力的不同 反复的溶解、挥发过程 (二) 高效液相色谱法 高压输液系统： 作用：提供足够恒定的高压，使流动相以稳定的流量快速渗透通过固定相。 组成：贮液器、高压泵、过滤器和梯度洗脱装置，其核心部件是高压泵，要求高压泵应具有输出压力高，输出流量恒定，流量设定范围可调。 梯度洗脱装置： 作用：在分离过程中，按一定的程序连续改变流动相中多种不同性质溶剂的配比，以改变流动相的极性、离子强度或酸度等，从而提高试样的分离效率，缩短分析时间，使色谱峰形得到改善，提高测定的灵敏度和定量的准确度。 四、色谱定性定量方法 (一) 色谱定性方法 (二) 色谱定量方法 常用定量方法 2）外标法(标准曲线法) 3）内标法 内标法特点 2. 高效液相色谱仪 高压输液系统 进样系统 分离系统 检测系统 数据处理系统 梯度洗脱等辅助装置 定性，即确定每个色谱峰代表什么物质。 定量，即测定出已知组分的含量。 1.利用纯物质定性的方法 利用保留值定性：通过对比试样中具有与纯物质相同保留值的色谱峰，来确定试样中是否含有该物质及在色谱图中的位置。不适用于不同仪器上获得的数据之间的对比。 利用加入法定性：将纯物质加入到试样中，观察各组分色谱峰的相对变化。 2.利用文献保留值定性 在色谱手册中都列有各种物质在不同固定液上的保留数据，可用来进行定性鉴定。 在一定条件下，待测组分的质量与其在检测器的响应信号(色谱峰面积)成正比： 即：mi = fi ·Ai ——色谱法定量的依据 A = 1.064 h·W1/2 fi ——校正因子 特点及要求： 归一化法简便、准确 进样量的准确性和操作条件的变动对测定结果影响不大 仅适用于试样中所有组分全出峰的情况。 1）归一化法： 特点及要求： 外标法不使用校正因子，准 确性较高 操作条件变化对结果准确性 影响较大 对进样量的准确性控制要求较高，适用于大批量试样的快 速分析 要求： （a）试样中不含有该物质； （b）与被测组分性质比较接近； （c）不与试样发生化学反应； （d）出峰位置应位于被测组分附近，且无组分峰影响 试样配制：准确称取一定量的试样W，加入一定量内标物mS 计算式： (a) 内标法的准确性较高，操作条件和进样量的稍许变动对 定量结果的影响不大 (b) 每个试样的分析，都要进行两次称量，不适合大批量试 样的快速分析 (c) 若将内标法中的试样取样量和内标物加入量固定，则： 色谱法(chromatography)：是一种重要的分离、分析技术，它是将待分析样品的各组分一一进行分离，然后顺序检测各组分的含量的方法. 色谱法也称层析法，是1906年俄国植物学家茨维特Michael Tswett发现并命名的。他在1906年作了一个混合植物色素的分离实验。 该图是他使用的装置。他把植物绿叶的色素混合液加在一根装有干燥固体碳酸钙颗粒的玻璃长管上端，然后让洗脱剂石油醚自上而下流过(以溶剂淋洗)，在石油醚不断冲洗下，原来在柱子上端的色素混合液向下移动。由于色素中各组分性质的差异，与碳酸钙作用力大小的不同，作用力小的先流出，作用力大的后流出(流动速率不同)，最后分离成不同颜色的色带，由此得名为“色谱法”。 碳酸钙填充物称为固定相。淋洗液称为流动相。所使用的装有碳酸钙的玻璃管称为色谱柱。 吸附色谱：利用固定相对不同组分的吸附性能差别分离；分配色谱：利用不同组分在两相中分配系数差别分离；离子交换色谱 ：利用不同离子在离子交换固定相上的亲和力差别分离；凝胶色谱：利用不同组分分子量差别而先后被过滤进行分离；排阻色谱法—利用多孔性物质对不同大小分子的排阻作用。 柱色谱法：固定相装在色谱柱中 纸色谱法：以吸附水分的滤纸作固定相 薄层色谱法：以涂敷在玻璃板上的吸附剂作固定相 同时分析：能把复杂的混合物分离为各有关组分，再分别检测出来 分离性能好：进行成千上万次的质量交换，使性质上仅有微小差别的组分得到分离 灵敏度高：可直接检测含量在ppm级甚至更低含量的成分 被分析试样从进样开始，经 色谱柱分离，到各组分全部流过检测器 在此期间所记录下来的响应信号随时间而变化的曲线