壳聚糖酶.docxVIP

武汉生物工程学院生物工程系生物工程综合实验论文  PAGE \* MERGEFORMAT 6 壳聚糖酶制剂制备工艺及其在壳寡糖生产中的应用 摘 要：利用紫外诱变产壳聚糖酶菌种，选择高产菌株进行发酵培养，同时改变发酵条件对产酶条件进行优化。结果表明：紫外照射5分钟诱变致死率为87.29%，这是最佳诱变剂量。最适发酵条件为：氮源为(NH4)2SO4，碳源为可溶性淀粉，发酵装液量为容器的35%，发酵最适温度为36摄氏度。 关键词：壳聚糖酶；壳寡糖；紫外诱变；优化 Chitosanase Preparation Method and Its Application in The Production of Chitooligosaccharides Abstract: Use of the UV mutagenesis production chitosanase strains, and select high-yielding strains for the fermentation, while changing the fermentation conditions to optimize the conditions for enzyme production. The results show that: the UV irradiated for 5 minutes mutagenesis lethality rate of 87.29%, which is the preferred mutagenesis dose. The optimal fermentation conditions were: nitrogen source (NH4)2SO4 carbon source for soluble starch fermentation medium volume to 35% of the container, fermentation optimum temperature of 32 degrees Celsius. Key words: chitosanase; chitooligosaccharides; ultraviolet mutagenesis; optimization 壳聚糖（chitosanase）是由D-氨基葡萄糖通过β-1,4糖苷键连接起来的生物多糖，可在酸性溶液中溶解，反应活性比甲壳素和纤维素都高[1]。 壳聚糖是自然界中唯一的天然碱性多糖，研究发现，其降解产物壳寡糖具有良好的水溶性、易被生物机体吸收且无毒、无热源、无变异性，并具有抗癌、抑菌等生理活性，在农业、食品、医药等领域的应用广泛[2-3]。目前，在壳聚糖的降解方法中酶降解法以其降解过程容易控制、反应条件温和以及对环境无污染等优点而成为壳聚糖降解的首选途径[4]。 传统的非专一性酶解法生产周期长，壳聚糖的转化率和壳寡糖的产率都低下。开发专一性的壳聚糖酶,并用以制备高品质壳寡糖产品,是开发利用我国丰富的几丁质、壳聚糖天然资源的核心问题,具有巨大的经济和社会效益[5]。本文主要研究从土壤中筛选产科聚糖酶的菌种，通过诱变育种、发酵条件优化等手段来改进传统非专一性酶解法所存在的不足之处。 1材料与方法 1.1 材料与仪器 产壳聚糖酶菌株 武汉生物工程学院酶工程实验室；壳聚糖、(NH4)2SO4、K2HPO4、KH2PO4、琼脂、MgSO4·7H2O、NaNO3、NaCl、牛肉膏、蛋白胨、尿素、葡萄糖、可溶性淀粉、麦芽糖、蔗糖、无水乙醇 均为国产分析纯；pH 5.0醋酸缓冲液、pH 8.0磷酸缓冲液、5% NaOH、无菌生理盐水、无菌水、1mol/L HCl 均为武生院酶工程实验室配制。 恒温水浴锅、高压蒸汽灭菌锅、电动搅拌器、磁力搅拌器、恒温发酵摇床、梯度混合器、恒流泵、电脑紫外分光光度计、紫外分光光度计、低温离心机、喷雾干燥机、真空泵、旋转蒸发仪、冰箱、低温冷冻干燥机、试管、摇瓶、移液枪、烧杯等。 1.2 实验方法 1.2.1 培养基配方 初筛复筛培养基：10g壳聚糖溶于300ml醋酸溶液（1%）+5g (NH4)2SO4+2g K2HPO4+1g MgSO4·7H2O+20g琼脂 +700ml水 液体发酵培养基：1%(NH4)2SO4+0.5% NaCl+0.05% MgSO4·7H2O+0.07% K2HPO4+0.03% KH2PO4+0.5%酵母提取物+1.0%胶体壳聚糖+0.1%葡萄糖 1.2.2 菌种初筛 壳聚糖不溶于水，以壳聚糖为唯一碳源的平板培养基为非透明状，产科聚糖酶菌株的周围因壳聚糖被消耗而形成透明圈，测量透明圈直径和菌落直径，比值较大的菌株即为产壳聚糖酶能力较强的菌。 按照初筛培养基配制500m