重组DNA技术和基因组学要点.pptVIP

第六章 重组DNA技术和基因组学 第一节 DNA克隆基础 DNA克隆 所谓克隆是产生一个一模一样的拷贝（复本）。DNA克隆是从一个较大的染色体分离一个基因或DNA片段，并把它嫁接到小分子DNA载体上，然后把它送入细胞，通过千百万次地增殖细胞数量，同时扩增每个细胞中克隆DNA的拷贝数，达到选择性地扩增某一个基因或DNA片段的方法。 从克隆任何一种生物DNA涉及下列过程 1. 使用限制性内切酶这种分子剪刀在精确位点切割DNA； 2. 选择一种能够自我复制小分子DNA作为克隆载体（cloning vectors），通常是质粒或病毒DNA； 3. 使用DNA连接酶共价连接待克隆的DNA片段和线性化载体DNA，产生不同来源DNA组成的“重组DNA分子”（recombinant DNAs）； 4. 把重组DNA分子转入一种寄主细胞，让细胞对重组DNA分子进行酶法复制； 5. 筛选或鉴别含有重组DNA分子的寄主细胞； 重组DNA技术（recombinant DNA technology） 遗传工程（genetic engineering） 一. 限制性内切酶和DNA连接酶制造重组DNA分子 II型限制酶 ；DNA连接酶 常用酶类： 逆转录酶，多核苷酸激酶，末端转移酶 外切核酸酶III，λ外切酶，碱性磷酸酶 二. DNA克隆载体 1. 质粒 2. 噬菌体（λ，lambda） 插入型载体，替换