重组子鉴定与筛选要点.pptVIP

第8章 重组体鉴定与文库筛选 1. 遗传检测筛选法 2. 限制酶切分析/电泳 3. PCR扩增检测法 4. 核酸杂交检测法 5. 免疫化学检测法 6. 酵母双杂交系统 7. 体外表达筛选技术（ 转译筛选法） 借助抗药性标记基因筛选：如 tet, bla 组织化学法筛选：如lacZ, gusA等 致死基因插入失活: 如sacB等 其他标记基因 ：营养缺陷互补基因、spi等 1. 遗传检测筛选法 2.限制酶切分析+电泳 插入片段的重组载体的分子量比空载体分子量大。 单一位点酶切：1个片段 2位点酶切：2个片段（一般选择克隆位点） 测序鉴定 ★ ★ 从转化后的菌体克隆中提取质粒，酶切后电泳、比较酶切片段的分子量大小。 Marker 空载体 外源 片段 3kb 2kb 4kb 重组 载体 重组 载体 2.6kb载体+1.4kb外源片段 3. PCR扩增检测法 原理： 设计引物扩增外源片段，如果能在模板序列上扩增出预期DNA片段，表明外源片段插入载体或基因组 从重组克隆中提取质粒（或DNA） 用外源DNA插入片段引物作PCR 电泳PCR产物。 检查是否有PCR产物。 PCR产物的长度是否与外源基因一致。 ★ 染色体 染色体 ACTTTGACTCCA TGAAAC G ACTTTGACTCCA TGAAACT marker (1).非探针杂交 异源双链