诊断分子生物学基本技术讲义.ppt

PCR技术探讨（The investigation of PCR technique Ⅱ 非特异性扩增 原因 引物浓度过高 引物设计不合理 酶量过多 循环次数过多 变性温度过低 延伸时间过短 模板量过多 建议 0.1um递减 改变引物位置与长度 0.5U递减 2个循环递减 2℃递增 10秒递增 酶量20%递减 单链构象多态分析技术（The analysis technique of single strand conformational polymorphism ） 概念 由DNA单链构象所决定迁移率的电泳技术 原理 在中性聚丙烯凝胶电泳时，DNA单链的迁移率除与长短有关，更取决于DNA自身折叠形成的由碱基顺序决定的构象，甚至单个碱基不同，迁移率就不同，因此检测出含有基因突变的DNA或RNA片段 特点 这项技术具有简便、快速、敏感、和经济等特点，适用于大样本基因变异的筛查 SSCP技术的应用（The application of SSCP technique） 适用于大样本基因变异的筛查 用于癌基因和抗癌基因突变的检测 DNA多态性分析 复等位基因的分析 遗传病的致病基因分析 基因制图 SSCP技术流程（The procedure of SSCP technique） 总RNA的提取 逆转录合成cDNA PCR特异扩增目的基因