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化妆品检验中心 体外评价体系简介 体外评价 体外评价是指在活生物体之外的环境中利用细胞、模拟活生物体模型等平台进行的评价。 在生物评价领域中,体外评价具有以下方面的特点 1、符合“3Rs”原则(Reduction,Refinement、Replacement) 2、检测结果的稳定性好、再现性高 3、可为临床评价提供有效的技术支持 体外评价体系的构成 评价项目的确立 1 评价内容的分析 2 评价方案的建立 3 最佳评价平台及方法的筛选 4 安全性评价 5 功效性评价 6 评价结果 7 安全性评价项目 1、刺激性评价 作为动物刺激性实验的代替法,使用3T3细胞分析评价被检物质的毒性指标。 兔角膜细胞SIRC 2、眼粘膜刺激性评价 向兔角膜细胞SIRC 添加被检物质,确认刺激性效果,再与标准品对比进行刺激性强度的评价 3、细胞毒性评价 向细胞添加被检物质,确认其对细胞的损伤情况,判断其毒性作用。 4、光毒性评价(UV照射) 对经过被检物质处理过的BALB/c 3T3小鼠成纤维细胞进行UVA照射后,以细胞摄取中性红为指标测算出细胞存活率,确定50%细胞毒性的被检物质浓度(TC50)。 通过UVA(+)、UVA(-)照射时的TC50应用下列公式计算出PIF值(Photo Irritant Factor)、MPE值可对被检物质的光毒性潜能进行评价。可以对单一成分和成品进行评价。 UVA - UVA + 样品浓度增加 细胞生存率降低 1、抗氧化应激作用评价 氧化应激(Oxidative Stress,OS)是指破坏了强氧化剂和抗氧化剂的平衡导致的潜在伤害,氧化剂、抗氧化剂平衡的破坏是细胞损伤的主要原因。 皮肤作为机体最外层的保护层,不可避免的受到紫外线与刺激物的作用,使皮肤细胞内的活性氧(Reactive Oxygen Species, ROS )过多增加,诱发氧化 应激作用,成为引起人体细胞老化的潜在因素。 功效性评价项目 人体皮肤细胞中氧化应激作用的形成原因 ① 紫外线照射(UVA、UVB) ② 过多活性氧的累计( ? OH 、O2-? 、H2O2、1O2 ) ③ 过氧化脂质(氧自由基与多聚不饱和脂肪酸反应的产物 ) 抗氧化应激作用的评价 评价方法: 对细胞进行氧化应激刺激,添加被检物质,通过对细胞生存率的分析来评估被检物质对氧化应激作用的预防与治疗作用。 评价项目: 评价消除由下列因素诱发的氧化应激作用的效果 ① UVA、UVB照射 ② 抗活性氧( ? OH 、O2-? 、H2O2、1O2 ) ③ 过氧化脂质 评价平台: 正常人体表皮角质形成细胞 正常人体皮肤成纤维细胞 被检物质添加时间点: 氧化应激刺激前 氧化应激刺激中 氧化应激刺激后 角质形成细胞 成纤维细胞 2、抗衰老作用评价 皮肤的衰老通常分为内在性老化和外源性老化。 内在性老化见于暴露和非暴露部位,明显的特征为皱纹和皮肤松弛,表现为表皮、真皮变薄,表皮真皮连接处变平、弹性纤维和胶原纤维减少等情况。外源性老化主要发生在皮肤内在性老化的基础上,常由紫外线等引起,见于面部、颈脖和前臂等光暴露部位,表现为粗深的皱纹、异常的色素沉着、毛细血管扩张等。 抗衰老是国内外美容皮肤病学研究的热门主题,对于抗衰老作用的评价,本实验室采用国际通用综合评价模式(体外评价+人体评价)。在体外对被检物质的抗衰老效果进行评价,取得的评估结果可为人体评价提供参考依据。 评价平台: 正常人体表皮角质形成细胞 正常人体皮肤成纤维细胞 化学反应检测 ① 促进胶原蛋白合成作用评价 表皮 基底层 真皮 皮肤基底层附近胶原蛋白示意图 4型胶原蛋白 7型胶原蛋白 1型胶原蛋白 1型胶原蛋白:存在于真皮的细胞外基质中,形成三股螺旋结构 4型胶原蛋白:多数存在于真皮与表皮之间的基底层中,起到支撑基底层结构的作用 7型胶原蛋白:以环状结构与基底层相连接,维持真皮基质的结构 对被检物质是否能提高人体皮肤成纤维细胞的1型胶原蛋白合成作用进行评价。伴随年龄的增加及外界环境的影响,皮肤内的1型胶原蛋白含量会减少,从而形成皱纹和皮肤松弛。本评价项目,通过向人体皮肤成纤维细胞添加被检物质后,测定细胞内1型胶原蛋白合成量(ELISA法),根据结果评定被检物质是否具有促进胶原蛋白合成的作用。 ② 胶原酶活性阻碍作用 胶原酶是一种能水解胶原蛋白的三维螺旋结构的分解酶。体内胶原酶会随年龄的增加以及外界环境的作用下,促进其活性的增加,从而加速其对胶原蛋白的分解,破坏皮肤结构,出现皱纹、皮肤松弛等皮肤衰老迹象。 让胶原酶与添加了被检物质的胶原蛋白反应,测定胶原蛋白的分解程度,通过实验结果分析被检物质是否具有阻碍胶原酶活性增加的作用,评估被检物质的衰老作用。 ③ 弹性蛋白酶阻碍作用 弹性蛋白酶作用是分解维持肌肤
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