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2.9 荧光原位杂交 Fluorescence in situ hybridization, FISH 非同位素原位杂交技术可用于测定细胞或组织中特异性转录物定位及其表达的相对水平。它是用一标记生物素或地高辛的非放射性探针和所制备样本的RNA进行杂交，非同位素探针通常通过荧光或酶法予以检测。FISH试验用水须以DEPC处理，所用溶液的配置均使用DEPC处理过的水，以抑制RNA酶活性。 1 杂交探针的制备 实验中针对AOB、NOB和Anammox bacteria的寡核苷酸探针如表2-9所示，合成。全菌数的检测采用DAPI 4,6-diamidino-2-phenylindole 染色，呈蓝色，双重染色后可以在显微镜的同一视野下观察可以检出细菌的丰度。探针由Invitrogen生物科技有限公司合成。表2-9 FISH中所使用的寡核苷酸探针 Tab.2-9 Oligonucleotide probes used for FISH in this study名称 染料 甲酰胺 % 核苷酸序列 5‘-3’ 目标菌 参考文献 GAC TTG CAT GCC TAA TCC Planctomycetales Amx820 Cy5 红 40 AAA ACC CCT CTA CTT AGT GCC C Anaerobic ammonium-oxidizing bacteri