关于前列腺癌干细胞及相关拟态血管(VM)的探索介绍.doc

关于前列腺癌干细胞及相关拟态血管(VM)的探索 0 前言 前列腺癌是目前中老年男性比较常见的恶性肿瘤，其发病率在北美和斯堪的纳维亚半岛最高，而在亚洲大部分国家发病率相对较低。我国前列腺癌的发病率和死亡率均较低，据国际癌症研究署(IARC)统计，2002年中国前列腺癌的标准化发病率是1.6/l0万，死亡率是1.0/10万［1］。仅就7.7/10万的高发病率位列本地男性泌尿生殖系肿瘤的第1位。CD44、CD133已经受到了广泛研究，且有研究者通过它们来分离鉴定前列腺癌干细胞，但随着研究的深入，在该领域现又有一些新的标志物被发现。有报道指出，CD44主要参与介导细胞粘附及信号转导，已被用作很多干细胞的标志物，目前也被用作前列腺癌干细胞的肿瘤标志物。整合素在癌症的发生、浸润及转移中发挥重要作用，且在前列腺癌中有失控的表达；c-met是肝细胞促生长因子的受体，c-met阳性细胞很可能代表了一群对生长因子敏感的细胞，从而使其高表达时更易诱导肿瘤运动、生长及扩散。Colombel等人发现初始前列腺癌中细胞锚定蛋白α2、α6整合素和细胞表面受体c-met高表达时易发生骨转移，而当仅α2，α6或c-met表达活跃时效果更为明显。前列腺癌干细胞的表型可以通过其所表达的抗原来描述，α2、α6整合素，CD44，CD133均存在于前列腺癌肿瘤干细胞中，但是许多学者发现CD44、CD133这些代表前列腺干细胞的抗原在原发肿瘤中低表达，相反，α2与α6整合素则在原发肿瘤中更为常见，且与前列腺癌的侵袭相关，表明α2、α6整合素可能能更特异地代表前列腺癌干细胞。CD166可介导细胞间相互作用，且在激素难治性前列腺癌中高表达。故CD44，整合素α2、α6，c-met与CD166很可能是前列腺癌干细胞的特异标志物，并可用于靶向杀伤前列腺癌干细胞［2］。然而CD133作为一个广泛应用的表面标志物，在多种肿瘤细胞表面都有表达，但由于我们对其分子功能知之甚少，还难以将其作为癌干细胞治疗的靶点。另外CD133的表达模式会因免疫组化染色差异而不同，所以并不是理想的人体前列腺癌干细胞标志物。CD133+细胞与CD133-细胞相比成瘤能力并无区别，并且CD133在正常前列腺组织表达不高，但是在前列腺癌的炎症区域却高表达，这些都提示CD133与前列腺癌干细胞缺少相关性［3］。随着研究的深入，CD133等传统的前列腺癌干细胞表面标志物开始受到质疑，有研究报道，隐藏在CD44+α2β1hi下的CD133-细胞才是肿瘤起始细胞。此外，ALDH1是细胞质中的一种酶，可将胞内的许多醛类转化为羧酸，参与胞内有毒物质的降解及细胞自我保护。Li等人通过对163例前列腺癌组织与18例正常前列腺组织的对比研究发现，ALDH1的水平越高，Gleason分数越高，病理分级也越高，而总生存率越低。取自人前列腺癌细胞中的一小部分ALDHhiα2+/α6+/αV+CD44+细胞还拥有体外高克隆、高侵袭、体内高成瘤及高转移性，故ALDH1可能也是前列腺癌干细胞的标志物。ABCG2 是一种ATP结合膜转运体，可将药物泵出胞外，与前列腺癌多重耐药性相关。去势治疗后，能从前列腺癌中分离出ABCG2+/AR-前列腺癌干细胞，表明ABCG2可能使前列腺癌干细胞逃避去势治疗、化疗及低氧环境的损害，故可将其用于前列腺癌干细胞标志物来靶向前列腺癌干细胞。 2 前列腺癌干细胞的分离筛选 目前，我们对前列腺癌干细胞的分离效率仍然较低，主要基于流式分选(FACS)和磁式分选(MACS)两种方法，但是这两种分选技术都依赖于干细胞表面标志如CD133。利用流式细胞仪分选的策略有两种：一是用一种或几种不同的荧光素标记的单克隆抗体标记单细胞悬液后，再用FACS分选。另一种就是用干细胞通用分子标志-BCRP1/ABCG2，这种基因在多种干细胞膜表面表达，而在大多数成熟细胞中不表达。如果干细胞不被Hoechest33342染色，利用FACS技术就可以从肿瘤单细胞悬液中分选出不染色的侧群细胞（SP)，从而分离出癌干细胞。MACS技术具有简便快速的特点，获得的细胞多、活力好，成本较FACS低，但单细胞纯度也低。其原理是用未标记的CD抗原等蛋白的单克隆抗体作为第一抗体与单细胞悬液温育后，再用免疫磁珠标记的第二抗体结合。将这种细胞悬液通过永久磁铁的磁场时，可吸附在磁式分选柱内，再将分选柱移开磁场收集干细胞［4］。Li Kui-qing［5］等人为了探索分离、鉴定来自人前列腺癌细胞系PC-3和LNCap前列腺癌干细胞更有效的方法，将前列腺癌细胞系PC-3和LNCap分别在无血清培养基（SFM）和血清补充的培养基（SSM）中培养，之后用流式细胞仪检测不同介质培养的前列腺癌干细胞的百分比，通过标记CD133和CD44前列腺癌干细胞的特性进行了初步鉴定。结果显