观察DNA和RNA在细胞中的分布介绍.doc

（二）观察DNA和RNA在细胞中的分布 “观察DNA、RNA 在细胞中的分布”是人教版生物必修一第二章第三节的实验。教科书建议使用人口腔上皮细胞做材料，进行固定、酸解、漂洗、染色等一系列操作，观察DNA、RNA 在细胞中的分布。但在教学实践中发现，按照教科书所示的实验方法难以做出预期的实验结果。常见口腔上皮细胞整个被染成粉红色，既没有出现甲基绿的颜色，也不能清晰分辨RNA的颗粒结构。 该实验原理是利用甲基绿和吡罗红对DNA 和RNA 亲和力的不同，让甲基绿与DNA 结合，使DNA 呈现绿色；让吡罗红与RNA 结合，使RNA 呈现红色。现今对这一染色机理有两种解释：电离作用与聚合作用。 （1） 电离作用：DNA 和RNA 都有磷酸基和碱基，为两性电解质，在一定的条件下可电离，因此都有等电点。甲基绿和吡罗红在水中电离后都产生阳离子。甲基绿电离后带两个正电荷，碱性较强。吡罗红电离后仅带一个正电荷，碱性较甲基绿弱。染色时两者竞争，碱性较强的甲基绿与细胞核形成极性吸着而结合，等电点为pH3.8~4.8。碱性较弱的吡罗红与细胞质吸附结合，等电点pH4.6~5.2。 （2） 聚合作用：甲基绿对聚合高的DNA 有亲和力，吡罗红对聚合低的RNA有亲和力。由染色机理可见，甲基绿与吡罗红的细胞染色对pH 要求很高。教材提供的试剂配方也提到B 液需将pH 调整到4.8，正是保证了甲基绿与吡罗红与细胞器结合的pH 条件。可是根据教材所给的操作步骤，口腔上皮细胞需要经过5 min 的酸解和10 s 的冲洗，这一操作显然很难完全去除残留的盐酸，导致细胞在染色前已经形成低pH 的环境，染液无法在适宜的pH下染色，最终染色失败。根据实践经验，若pH 偏低，甲基绿染色效果不好；若pH 偏高，则吡罗红染色效果差。在pH 极低的环境下，甲基绿完全不着色。根据以上对染色原理及操作步骤的分析讨论，现提出一种以洋葱内表皮为实验材料的简化实验方法： 1. 简化的实验方法： （1） 在干净的载玻片上滴加一滴现配的吡罗红甲基绿染色剂。 （2） 撕取洋葱内表皮，置于染色液中。 （3） 染色1 min。 （4） 盖上盖玻片，吸去多余染液，显微镜观察。 这一简化方法保证了细胞染色全程在适宜的pH下进行，能产生预期的染色效果，明显可见细胞核被染成绿色，细胞质里有颗粒状结构被染成红色。其次，利用植物细胞的特性，可省略固定及酸解步骤，节省操作时间，减少出错机会。经改进，本实验成功率达100%，实验操作时间节省60%。课堂上学生能有更多的时间进行显微镜观察，教师也有充裕的时间进行理论讲解与个别指导。 这种简化方法既增加了学生的成功体验，也提高了教学效率，广受师生的欢迎与肯定。可根据具体染色情况，调整甲基绿水溶液与吡罗红水溶液的比例。 2．实验的改进研究 观察DNA 和RNA在细胞中的分布是人教版高中生物学教材(必修1)中的一个实验, 实验材料为人 的口腔上皮细胞和洋葱鳞片叶内表皮细胞, 实验基本步骤为: 取细胞制片, 将装片放在酒精灯火焰上烘干固定, 然后放入装有30mL质量分数为8%的HCl溶液的小烧杯中, 再将小烧杯置于装有30℃温水的大烧杯中保温5m in, 接着用蒸馏水冲洗载玻片10s, 吸去水分后滴加甲基绿吡罗红染色剂染色5m in, 然后盖上盖玻片, 用显微镜观察。众多教师反映, 该实验结果不理想。人的口腔上皮细胞的细胞核和细胞质均被染色成紫红色, 偶见一二个细胞的细胞核略呈蓝紫色。洋葱鳞片叶内表皮细 胞实验效果较好些, 但染色效果仍不明显。为此, 本文在教材建议方法基础上对实验条件步骤进行了比较研究, 取得了理想的结果。 Ⅰ 实验方法的改进探讨 1. 1 观察人的口腔上皮细胞DNA和RNA 的分布 取8个装片, 标上序号a～h。按表1方法分别制片, 并观察实验现象。其中, 装片d为教材提供的实验方法。 表1 人的口腔上皮细胞装片的不同制作方法 步骤编号滴1滴生理盐水在载玻片上涂人 腔上皮细胞烘干玻片HCl水解水洗滴加1滴染色剂染色5min实验现象a ＋ ＋ 60℃的电热鼓风干燥箱 5min 蒸馏水 细胞核为紫红色b ＋ ＋ 60℃的电热鼓风干燥箱 5min 1% NaHC3溶液 细胞核为紫红色60℃的电热鼓风干燥箱 细胞核为蓝绿色 火焰上 5min蒸馏水 细胞核为紫红色 火焰上 细胞核为紫红色 － － ＋ 细胞核为蓝绿色 － － ＋ 细胞核为蓝绿色 滴加1滴染色剂染色 5min细胞核为蓝绿色 进行此项操作, 不进行此项操作