黑素瘤分泌的PAEP对体外T淋巴细胞免疫抑制作用研究-介绍.doc

中图分类号 墅 学校代码§三 密级 公珏 硕士学位论文 黑素瘤分泌的对体外淋巴细胞免疫抑制作用 的研究 / 作者姓名: 柴丽娜 学科专业: 基础医学 研究方向: 病理学与病理生理学 学院系、所: 基础医学院 指导教师: 韩颖 副指导教师: 任素萍 ◇ 、,’ 论文答辩日期二鎏丝列 答辩委员会主席兰獠 中 南 大 学 年月原创性声明 本人声明,所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作 及取得的研究成果。尽我所知,除了论文中特别加以标注和致谢的地方外, 论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中南 大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本 研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。 作者签名: 氅亟塑 日期:立虹年』月丛日 学位论文版权使用授权书 本入了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权 保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文,允许学位 论文被查阅和借阅;学校可以公布学位论文的全部或部分内容,可以采用 复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所 将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》,并通过网络向社会公 众提供信息服务。 作者签名:生匾卑 导师签名艇日期:韭年上月丛日黑素瘤分泌的对体外淋巴细胞免疫抑制作用的研究 摘要 恶性黑素瘤是皮肤黑素细胞系统所发生的恶性程度最高的肿瘤之一 【。尽管近年来生物科学在各个领域迅猛发展,黑素瘤的临床治疗手段却 没有根本的改进,死亡病例高达皮肤癌所致死亡的%‘】,因此深入分 析黑素瘤的发病机制,探索有效的治疗方案非常重要。以往的研究表明, 黑素瘤的发生发展与孕激素相关子宫内膜蛋白. ,表达量密切相关,但是其作用机理尚不明确。 本研究拟对促肿瘤发展的免疫机制进行分析和探索。 又称为,最早是从人类胎盘、羊水、怀孕期子宫蜕膜 中发现并分离出的一种糖蛋白。大量的研究表明,它能够抑制细胞的 免疫活性,对妊娠期母体免疫耐受的建立和半相合胚胎植入起重要 的调节作用】。我们以往的研究发现基因在恶性黑素瘤组织和及体 外培养的细胞系中高水平表达,对肿瘤细胞的迁移侵袭具有促进作用【。 鉴于肿瘤侵袭和胚胎植入的相似性,我们推测存在这种可能:高表达的 对细胞具有负性调节作用,使得肿瘤细胞逃脱了免疫细胞的监视 和杀伤而迅速发生浸润转移。 为了证明这个假设,我们从以下三方面进行了研究:。采用 和 检测在黑素瘤细胞系中和蛋白的表达;.利 用化学合成的 和 重组慢病毒感染肿瘤细胞,下 调的表达并通过药物筛选获得表达抑制的稳定细胞系,为下 一步实验提供蛋白样品及细胞模型;.分离人外周血单个核细胞及纯化 的细胞,分别将蛋白或表达抑制的肿瘤细胞与淋巴 细胞混合,与对照组相比观察淋巴细胞的增殖、凋亡和肿瘤杀伤功能的变 化。实验结果显示:.分别从和蛋白水平证实了基因在黑 素瘤细胞系的表达;. 显著降低了 的表达;通 过慢病毒转染获得了表达抑制的稳定细胞系及非靶向对照 细胞;.条件培养上清加入体外活化的淋巴细胞后,细胞增殖明显 变慢,细胞凋亡比例增加;.经表达抑制的肿瘤细胞诱导的效应 淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤率明显高于对照组。体外实验表明蛋白 抑制淋巴细胞增殖和细胞毒作用,增殖抑制作用可能由促凋亡引起。 图幅,表个,参考文献篇 关键词:基因;淋巴细胞;免疫抑制;恶性黑素瘤 分类号: / , 【. ,% ., . ’ ? . ,.,.? ,, , . , 【. . 【, .’ , : ; ?;, , ,. : ;动 淑 心,队 ; ; ,; . 觑 ’ . ? . : ; ;; : 目 录 原创性声明?. 摘要?.?.?......?.?.?.?.?......?..??. 目豸:?. 符号说明前言?一 表达抑制细胞系的建立. 材料.. ..主要仪器??. ..主要试剂??. ..主要液体及配制??. ..细胞系. .. 和慢病毒为载体的构建.方法.. .. 黑色素瘤细胞系的培养??一 。. 提取和基因扩增?一 .. 瞬时转染 .. 检测瞬时转染后的表达?一 ..慢病毒介导的 稳定转染黑素瘤细胞??一 .. 检测稳定转染后的表达?. .. 检测稳定转染后蛋白水平的表达变化??.. . 结果?.. .。 .一和细胞表达? .. 能有效地降低..细胞的表达.慢病毒对..细胞有较高的转染效率?。 .. 表达抑制稳定细胞株的建立~ .讨论 外周血淋巴细胞的体外培养.材料 . 主要仪器..主要试剂..主要液体及配制..外周血 .方法..密度梯度离心法分离 .. 的体外刺激培养.. 检测存活率? ..免疫磁珠分选细胞 .结果??. .. 体外培养条件优化? ..免疫磁珠分选细胞的得率和纯化效率? .讨论 黑素瘤分