基因工程技术分析.docxVIP

电泳的迁移率 (Electrophoretic mobility)：带电荷的分子被放入电场中时，会以一定的速度移向适当的方向，这种电泳分子在电场作用下的迁移速度，叫做电泳的迁移率。 迁移率大小取决于电场强度，自身电荷量，核酸分子本身的大小和构型 脉冲电场凝胶电泳（Pulse alternative field gel electrophoresis，PFGE） 应用：分离超大分子量的DNA分子。 1.Southern blot：根据毛细管作用的原理，使在电泳凝胶中分离的DNA片段转移并结合在适当的滤膜上，然后通过同标记的单链DNA或 RNA探针的杂交作用检测这些被转移的DNA片段，这种实验方法叫做DNA印迹杂交技术。 印迹转移前的凝胶处理：分子量不同所需转移的时间不同；为了得到一个更好的转移效果，需要将电泳胶浸泡在0.25M的HCL溶液中脱嘌呤 (碱水解，DNA链断裂)，再进行碱变性 (单链)。 2.Northern blot：1979年，J.C.Alwine等人发展而来，是将RNA分子从电泳凝胶转移到硝酸纤维素滤膜或其他化学修饰的活性滤纸上，进行核酸杂交的一种实验方法。 Western blot： 将蛋白质从电泳凝胶中转移到硝酸纤维素滤膜上，然后同带有特定标记的蛋白质质抗体进行反应，这种技术叫做Western blot。 3. 斑点印迹杂交和狭线印迹杂交