免疫印迹-091208创新.doc

Western blotting(2007.7) 洗净玻板，与胶接触的一面倾斜朝下晾干。放入电泳橡胶套内卡好(有框为高;平面为低） 封板： （配胶全过程须戴手套和口罩，被有毒物质污染的手套必须丢弃！) 1%琼脂糖(微波加热, 液体刚沸腾即可)全溶后用枪将电泳橡胶套底部封好（两面） 一块胶约2—4ml [琼脂糖0.5 g，加水至50ml] 将其装入电泳槽内，玻璃板高的一边通正极（红色钮） 蛋白从负极向正极跑 分离胶：配胶（附后），一般分子量大的按10%配(or 8%)，分子量小的按12%配， 10%的过硫酸铵现用现配，10%的SDS加热溶解后再用 15-20 ml/板 将电泳槽倾斜，将上述分离胶注入至离上样梳约1cm，并在上面加2-3mm 高的异丙醇 约500 ul/板，目的防止氧气扩散进入凝胶而抑止聚合反应 约30min后凝固，倒出异丙醇，并用去离子水冲洗10次，再用滤纸轻轻吸出残余的水 长时间(2-3h)有利于胶结构形成，因为肉眼看胶凝时，胶内部分子的排列尚未完成 基层胶：基层胶的配制（附后，室温时胶凝聚比较快，夏天约需5 min，5-6ml/板) 将剩下的基层胶放置冰水中可延缓胶凝聚 基层胶如果收缩应及时补胶 插上上样梳(必需是干净干燥的，倾斜插入以排气泡)，注意上