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实验四 酪蛋白的制备 * 一 实验原理 牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白,含量约为 35 g/L。 酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物,等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理,将牛乳的pH调至4.7,酪蛋白就会沉淀出来了。 实验时用水、乙醇等洗涤沉淀物,除去脂类等杂质后便可以得到较纯的酪蛋白了。 * 二 实验步骤 1. 用量筒取蒙牛纯牛奶35ml——倒入锥形瓶中——在水浴锅中加热到40℃——然后缓慢加入醋酸缓冲液35ml,同时用玻璃棒搅拌—— 然后用精密pH试纸测验pH值,看是否在4.7左右——若未到再加入醋酸缓冲液,直到pH在4.7左右 2. 然后拿出锥形瓶冷却——将牛奶液倒入大离心管中,盖好盖子——离心15min,v=5000——弃去上清液——沉淀即为粗酪蛋白 * 3. 离心清洗去杂过程: ① 往离心管沉淀中倒入 10ml 的 DW——用玻璃棒搅拌——盖上盖子,再离心 5min,v=5000——弃去上清液 ② 沉淀中加入6ml 乙醇——搅拌均匀——盖上盖子,离心 5min,v=5000——弃去上清液 ③沉淀中加入6ml 乙醇-乙醚混合液——搅拌均匀——盖上盖子,离心 5min,v=5000——弃去上清液 * 4. 沉淀中加入6ml 乙醚——搅拌——然后将滤纸称重,记录重量 m ——再用滤纸过滤——滤纸上留下的即为纯品酪蛋白 5. 将滤纸上的酪蛋白自然风干一个星期——然后称重,记录重量M 6. 计算得率: 酪蛋白得率 g = ( M – m ) / 35 ×100% * Thank you ! *
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