小鼠脾脏原代细胞介绍.docVIP

小鼠脾脏原代细胞培养与细胞死活鉴定和计数 实验目的 学习掌握细胞培养的基本原理及具体操作方法，并对小鼠脾细胞进行原代培养 掌握并熟悉无菌操作的要点，并养成无菌操作的习惯 学习用染色法鉴别细胞死活并进行细胞计数 学会利用血球计数板对细胞总数和活细胞进行计数 实验原理 ①细胞培养： 多细胞生物的细胞可以被分离出来，然后在体外特殊培养环境中继续存活，并保持其生理、生化特性直接从生物体分离出来，在体外培养过程中尚未分裂、增殖的细胞，称为原代培养细胞。原代培养细胞在一定条件下可以继续增殖，在数量上大量扩增，这时就成为继代培养细胞。 细胞培养基要满足细胞的生长需要，培养细胞的条件有水的质量、无菌环境，最适温度、渗透压、气体条件、最适PH、营养条件和培养基质等。细胞培养皿是特殊制造的使细胞可以贴壁。 细胞培养箱常指二氧化碳培养箱。它可以提供合适的温度和二氧化碳浓度。二氧化碳和培养基中的缓冲系统共同作用，保持细胞培养液的酸碱度。超净台通过将空气进行过滤，为细胞培养的各种操作提供了一个干净的环境，使细胞培养免于细菌和真菌的污染。 ②细胞生死状态的鉴别方法主要是化学染色法和荧光染色法： 活细胞和死亡细胞在生理技能和性质上主要存在一下差异： I.细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性地通过；而细胞死后，细胞膜受损，其通透性增加。基于此，发展出了以台盼蓝