城疫的实验室诊断技术分析.pptVIP

实训 新城疫（禽流感）的诊断一、初步诊断二、实验室诊断 1、病毒分离培养 一、实训目的 较系统的了解和掌握新城疫的初步诊断和实验室诊断。 掌握新城疫（禽流感）病毒分离培养接种材料的准备、照蛋的方法 。 掌握新城疫病毒接种方法和尿囊液收获的方法。 二、实训器材 仪器：恒温培养箱、离心机、照蛋器、超净工作台 材料：灭菌研钵、灭菌生理盐水（每组50ml)、灭菌蒸馏水100ml、灭菌平皿（每组1个）、灭菌离心管（带盖）、注射器（1ml、5ml）、碘酊棉、酒精棉、酒精灯、铅笔、打孔器、蜡、蛋架、解剖盘、剪刀、镊子 、9-10日龄鸡胚 药品：庆大霉素、消毒药 其他：新城疫的病死禽 三、实训方法步骤 （一）初步诊断：症状观察、流行病学调查、病死鸡剖检，取病料。 （二）病毒分离培养 1、鸡胚的选择和孵化 发育正常的鸡胚：可见清晰的血管和活的鸡胚，血管及分支明显，呈鲜红色，鸡胚可以活动。 死胚：胚体固定在一端不动，看不到血管或血管消散。 日龄选择 卵黄囊接种，6一8日龄 绒毛尿囊腔接种，9一10日龄 绒毛尿囊膜接种，9一13日龄 血管注射：12一13日龄 羊膜腔或脑内注射：10日龄 血管注射 2、鸡胚接种前的准备 病毒接种材料的处理 液体材料：加抗生素置室温1h或冰箱12一24h，离心取上清液；过滤除菌 患病动物组织：取病料，放入研钵，剪碎、研磨，用生理盐水稀释5倍，每毫升加入2000IU庆大，室温中1h或冰箱12～24h，1000r/min离心取上清液。 照蛋 取9～10日龄鸡胚进行照蛋，以铅笔划出气室、打孔的位置。 3、鸡胚的接种 消毒 打孔：用打孔器在酒精灯火焰烧灼消毒后，在气室顶端和气室下沿无血管处钻一小孔。 接种：用注射器吸取接种液0.2ml，针头从气室下沿小孔处插入，深0.5cm，即已穿过了外壳膜且距胚胎有半指距离时注入。 封口：注射后以石蜡封闭小孔，置孵育箱中直立孵育。 4、接种后的检查 接种后24h内死亡的鸡胚，是由于接种时鸡胚受损或其他原因而死亡，应该弃去。 24h后，每天照蛋2次，如发现鸡胚死亡立即放人冰箱，于5天内不能致死的鸡胚亦放人冰箱冻死。 死亡的鸡胚置冰箱中l一2h即可取出收取材料并检查鸡胚病变。 5、鸡胚尿囊液收获 器材：超净工作台、蛋架、鸡胚、碘酊棉、酒精棉、镊子 、注射器（5ml）、灭菌西林瓶、灭菌平皿 方法步骤 消毒气室端。 用无菌镊子去气室顶壳，开口直径为整个气室区大小，以无菌镊子撕去一部分蛋壳膜，在无大血管处撕破绒尿膜。 用镊子轻轻按住胚胎，以无菌吸管或注射器吸取绒毛尿囊液置于灭菌西林瓶中。（收集的液体应清亮，混浊则表示有细菌污染，丢弃。） 密封、写标签，冰冻保存，作毒种或试验用。 观察鸡胚病变。 所有材料用具煮沸后丢弃或清洗。