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5.2多聚酶链式反应扩增DNA片段 课件(人教版选修1).ppt
解析:从冰箱中放置的缓冲液和酶取出后应放在冰块上缓慢融化,而不能迅速融化。 答案:C 情景导入 知识梳理 方法突破 栏目链接 专题5 DNA和蛋白质技术 课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段 情景导入 知识梳理 方法突破 栏目链接 情景导入 知识梳理 方法突破 栏目链接 在刑事侦破案件中常需要对样品DNA进行分析,PCR技术能快速扩增DNA片段,在几个小时内复制出上百万份的DNA拷贝,有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的问题。现在PCR技术已广泛应用于遗传病的诊断、刑侦破案、古生物学、基因克隆和基因测序。 情景导入 知识梳理 方法突破 栏目链接 请思考: 1.PCR技术的基本原理是什么? 2.PCR反应过程是怎样的? 情景导入 知识梳理 方法突破 栏目链接 情景导入 知识梳理 方法突破 栏目链接 1.生物体内DNA复制的条件 (1)原料:___________________________________________________。 (2)模板:解旋后的每一条____________。 (3)酶:打开DNA双链的________和合成DNA单链的____________。 (4)引物:为DNA聚合酶的起始提供________末端。 一、PCR的原理及反应过程 4种脱氧核苷酸 DNA母链 解旋酶 DNA聚合酶 3′ 情景导入 知识梳理 方法突破 栏目链接 2.PCR扩增的原理 (1)概念:PCR即多聚酶链式反应,是一种体外________________的技术。它能以极少量的DNA为模板,在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝。 (2)原理: ①DNA变性:在__________的温度范围内,DNA的________结构将解体,双链分开,这个过程称为变性。 迅速扩增DNA片段 80 ~100 ℃ 双螺旋 情景导入 知识梳理 方法突破 栏目链接 ②DNA复性:当温度缓慢降低后,两条彼此分离的DNA链又会重新____________,这个过程称为复性。 ③DNA合成:DNA聚合酶从引物____________端开始延伸DNA链,DNA的合成方向总是从子链的________端向________端延伸。 结合成双链 3′ 5′ 3′ 情景导入 知识梳理 方法突破 栏目链接 (3)条件: ①模板:解旋后的每一条___________。 ②引物:能分别与____________结合的两种引物。 ③原料:____________________________________________________。 ④酶:________DNA聚合酶。 ⑤其他条件:需要稳定的__________和能自动调节温度的温控设备。 DNA母链 两条模板链 4种脱氧核苷酸 耐热的 缓冲溶液 情景导入 知识梳理 方法突破 栏目链接 90 ℃ 50 ℃ 碱基互补配对 情景导入 知识梳理 方法突破 栏目链接 72 ℃ DNA聚合酶 碱基互补配对原则 情景导入 知识梳理 方法突破 栏目链接 1.实验用具 (1)PCR仪:该仪器能自动调控________,实现DNA的扩增。如果没有PCR仪,可用3个________水浴锅代替,操作时按程序在3个水浴锅中来回转移PCR反应的微量离心管。 (2)微量离心管:总容积为________mL,实际上是进行PCR反应的场所。 (3)微量移液器:用于向微量离心管中转移PCR配方中的液体,每吸取一种试剂后其上的一次性吸液枪头都必须更换。 二、PCR的实验操作 温度 恒温 0.5 情景导入 知识梳理 方法突破 栏目链接 2.实验步骤 用微量移液器 轻轻弹击 情景导入 知识梳理 方法突破 栏目链接 10 情景导入 知识梳理 方法突破 栏目链接 3.DNA含量的测定 (1)原理:利用DNA在________的紫外线波段有一强烈的吸收峰。 (2)计算公式: DNA含量(μg/mL)=__________________×稀释倍数。 点拨:在PCR实验操作中,常用微量离心管作为反应场所,在操
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