03细胞和细胞器及间质的分离技术分析.docVIP

第三章 细胞和细胞器及间质的分离 细胞内各种结构的比重、大小不同，在同一离心场内的沉降速度也不相同，所以常用不同介质、不同转速、不同时间，通过分级离心，将细胞内各种结构组分（细胞核、核仁、线立体、高尔基复合体、溶酶体、染色体等）分离出来。主要方法是：组织匀浆的制备、离心分级分离各组分、分析鉴定三个步骤。 细胞的分离 根据细胞的大小、密度常可分离不同具有不同生物学特征的各种细胞亚群。其原理是处于悬液中的细胞沉降率与细胞的直径成比例，也与细胞密度和分离介质密度之间差异成比例，假设细胞为球形，则其在溶液中在引力场内的沉降速度以下列公式表示V= 2g(ρc–ρs)r2 9η 遵循Stokes定律，其中：ρc和ρs分别是细胞和溶液的密度，η为溶液粘度，r为细胞半径，g为重力加速度。 根据细胞直径（大小）的分离方法：主要是速度下降。细胞在单位引力下，通过低密度介质，或在低离心力作用下，通过密度梯度沉降。由于细胞大小不同，沉降速度不同，细胞越大沉降越快。 根据细胞密度分离是等密度分离，就是细胞在连续密度梯度分离介质中，在强离心作用下，细胞最后到达与其自身密度相同的分离介质层面，并能保持平衡，在非连续密度梯度中，分离的细胞主要集中于介乎其自身密度两种密度介质的交界面上，从而达到分离。 操作方法： （一）单位重力沉降法： 分离介质主要是牛血清白蛋白，其分离的