3槟榔花中酚类物质对紫外损伤HSF细胞的保护作用技术分析.docVIP

3 槟榔花中酚类物质对紫外损伤HSF细胞的保护作用 1 材料与方法 1.1 材料与试剂 表儿茶素、没食子酸、芦丁和香豆酸，美国sigma公司；人皮肤成纤维细胞HSF，中国科学院细胞库提供；MTT、二甲基亚枫DMSO)，美国Sigma公司；DMEM培养基、胰酶Trypsin)，美国Gibco公司；胎牛血清FBS)，杭州四季青生物工程材料有限公司；美国Gibco公司其他均为AR级试剂。 1.2 主要仪器 荧光测读仪Thermo scientific varioskan ascent FL)；CO2培养箱WJ-185I)；倒置显微镜leica)；离心机TDZ4-WS)； 超净工作台ZHJH-1109B)等。 1.3 实验方法 紫外损伤模型的建立 HSF细胞培养于含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基中，培养条件为 5%CO2，温度37℃，饱和湿度。当细胞处于对数生长期时，用0.25%胰酶消化后用吸管吹打成单细胞悬液，以2×105个/mL的密度接种于35mm细胞培养皿中，过夜培养。 实验分为正常对照组、紫外照射组照射时间分别为1h，2h，3h。首先吸除各细胞培养皿中的培养液，PBS冲洗一次后加入700μLPBS覆盖底面避免干燥，紫外照射组放入20W短波紫外灯下照，照射距离为20cm，正常对照组不经过紫外照射。紫外照射结束后，采用MTT法测定各组细胞存活率。 酚类物质对HSF细胞紫外损伤的保