如何选择第二抗体重点分析.docVIP

如何选择二抗 抗体简介 抗体：是高等动物在抗原物质的刺激下由浆细胞产生的一类能与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。抗体通常存在于血清合淋巴（组织液）中。 单克隆抗体及多克隆抗体：由单一克隆的细胞（通常是单一克隆的杂交瘤细胞）所产生的识别某一抗原表位的单一抗体；多克隆抗体是由多种细胞分别接触相应抗原而产生的多种抗体的总和，多克隆抗体抗原识别抗原的多个表位。 抗体结构：抗体是由四条肽链构成的“Y”形对称的分子，包括两条重链和两条轻链。在“Y”的尖端部位的氨基酸顺序在不同的抗体分子中差别很大，是负责与抗原进行特异性结合的区域，称为可变区，余下的区域则称为恒定区。 抗体分类 抗体分类：根据重链恒定区的血清学类型，可将抗体分为IgM，IgG，IgA，IgD，IgE五类，它们的重链分别为mu, gamma, alpha, delta, epsilon链。在上述每一类别中，按重链构造上的变异又可分为几个亚类，例如人的IgG可分为IgG1，IgG2，IgG3，IgG4四个亚类。 轻链分为两种类型，kappa链和lambda链，但每种抗体中只存在一种类型的轻链。 二抗：二抗是在其它宿主体内制备的能与一抗或一抗片段结合的抗体，上面通常连有酶或荧光素等标签。由于二抗所具备的优点使得其在免疫学实验中得以应用广泛，如western blot（通过与特异性抗体结合来鉴定蛋白质），ELISA（以耦联有酶的抗体或抗原为标记来检测特异性的蛋白质，尤其是相应的抗原或抗体），免疫组织化学（检测组织中的特异性抗原），免疫细胞化学（通过免疫学方法检测细胞的抗原组成），流式细胞术（通过检测激光所激发荧光来鉴定分离不同类型的细胞）及免疫沉淀（通过抗原与抗体的特异性结合作用来分离相应抗原）。二抗针对某一特定物种（如小鼠）的所有抗体均具有特异性，因而使用标记的二抗可以免去对每一个一抗进行标记，大大节省了时间和费用；此外，一个一抗分子可以同时结合几个二抗分子，从而使信号大大增强，提高了实验灵敏度。 二抗可以耦联有几种不同的标记，可以是酶，荧光素，或生物素。 抗体特异性 产品 整个分子 (H+L) 特异性抗体 Affinity Purified Anti-BOVINE IgG (HL) (GOAT) Peroxidase Conjugated Anti-BOVINE IgG (HL) (GOAT) Fluorescein Conjugated Affinity Purified Anti-BOVINE IgG (HL) (GOAT) Fab 特异性抗体 Peroxidase Conjugated Anti--HORSE IgG F(ab)2 (GOAT) Fluorescein Conjugated Affinity Purified Anti-CHICKEN IgG F(ab)2 (RABBIT) Affinity Purified Anti-BOVINE IgG F(ab)2 (GOAT) Fc 或重链特异性抗体 Affinity Purified Anti-CHICKEN IgM (mu chain) (GOAT) Cy2 Conjugated Affinity Purified Anti-MOUSE IgG2a (Gamma 2a chain) (RABBIT) Fluorescein Conjugated Anti-MOUSE IgG (gamma chain) (RABBIT) 轻链特异性抗体 Anti - Kappa Light Chain (B - Cell Marker) AP Goat anti Rat IgG, Light Chain Biotin-SP Goat anti Mouse IgG Light chain specific 吸附处理的抗体 Cy2-IgG Fraction of Monoclonal Mouse Anti-Rabbit IgG, Light Chain Specific (min X Bov, Gt, Arm Hms) Mouse anti-Rabbit IgG (H+L) (min X Hu, Gt, Ms, Shp Sr Prot) Table 1. 典型的整个IgG分子的二抗 如何选择二抗 通常情况下，某一特定的实验中可能同时有几种二抗可供选择，如何能选择到最适合该实验的二抗，需要综合以下几个方面进行考虑： 一抗的物种来源 一抗是在什么物种来源的，相应的二抗也要是抗该物种的抗体。例如，如果一抗是在小鼠体内制备的，那么你就应当选择抗小鼠的二抗，如果一抗是在兔体内制备的，那么二抗就应当是抗兔的抗体。至于二抗本身是在什么动物中制备的对二抗的质量并无明显的影响。 一抗是属于哪个类或亚