生物大分子分离技术研究进展重点分析.docVIP

生物大分子分离技术研究进展利用小分子物质在溶液中可通过半透膜，而大分子物质不能通过半透膜的性质，达到分离的方法。例如分离和纯化皂甙、蛋白质、多肽、多糖等物质时，可用透析法以除去无机盐、单糖、双糖等杂质。反之也可将大分子的杂质留在半透膜内，而将小分子的物质通过半透膜进入膜外溶液中，而加以分离精制：透析是否成功与透析膜的规格关系极大。透析膜的膜孔有大有小，要根据欲分离成分的具体情况而选择。透析膜有动物性膜、火棉胶膜、羊皮纸膜（硫酸纸膜）、蛋白质胶膜、玻璃纸膜等。油常多用市售的玻璃纸或动物性半透膜扎成袋状，外面用尼龙网袋加以保护，小心加入欲透析的样品溶液，悬挂在清水容器中。经常更换清水使透析膜内外溶液的浓度差加大，必要时适当加热，并加以搅拌，以利透析速度加快。为了加快透析速度，还可应用电渗析法，即在半在半透膜旁边纯溶剂两端放置二个电极，接通电路，则透析膜中的带有正电荷的成分如无机阳离子、生物碱等向阴极移动，而带负电共荷的成分如无机阴离子、有机酸等则向阳极移动，中性化合物及高分子化合物则留在透析膜中。透析是否完全，须取透析膜内溶液进行定性反应检查。超滤膜筛分过程，以膜两侧的压力差为驱动力，以超滤膜为过滤介质，在一定的压力下，当原液流过膜表面时，超滤膜表面密布的许多细小的微孔只允许水及小分子物质通过而成为透过液，而原液中体积大于膜表面微孔径的物质则被截留在膜的进液侧，成为浓缩液，因而实现对原液的净化、分离和浓缩的目的。超滤技术分离效率高，对稀溶液中的微量成分的回收、低浓度溶液的浓缩均非常有效也有一定的局限性，它不能直接得到干粉制剂。对于蛋白质溶液，一般只能得到10～50%的浓度。溶剂是最早使用的区带电泳gel electrophoresis, 2-DE)技术又称二维凝胶电泳技术，是目前常用的唯一一种能够连续地在一块胶上分离数千种蛋白质的方法，第一，采用等电聚集电泳。第二，采用了十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳。广泛应用于生物学研究的各个领域，其原理是将高分辨率的等电聚集电泳和SDS电泳联合组成双向电泳。 3.1.4免疫电泳 免役电泳是电泳分析与沉淀反应的结合产物。该技术有两大优点：一是加快了沉淀反应的速度，二是将某些蛋白组分根据其带电荷的不同而将其分开，再与抗体起反应，从而使本法更为微量化、多样化。因此，其应用范围日益扩大。该方法可以用来研究：①抗原和抗体的相对应性；②测定样品的各成分以及它们的电泳迁移率；③根据蛋白质的电泳迁移率，免疫特性及其他特性，可以确定该复合物中含有某种蛋白质；④鉴定抗原或抗体的纯度。 3.1.5电泳与其他联用技术 毛细管电泳时带电粒子在电场力的驱动下，在毛细管中接其淌度或分配系数不同进行高效、快速分离的电泳新技术，也称为高效毛细管电泳。其分离模式有：毛细管区带电泳、胶束电动色谱、毛细管凝胶电泳、毛细管等速电泳、毛细管等点聚焦，毛细管电色谱。毛细管电棘(EE)作为一种分离技术与质谱(MS)联用作为一种检测方法，在食品分析领域具有重要优势，因为它结合了毛细管电泳的强分离能力以及质谱在定性和确证方面的强大功能。近来，许多有关多维毛细管电泳分离技术的设想已被提出有些还得到了初步的尝试，其分离的优势也得到人们的关注。与传统的分离方法相比，CE具有分离效率高、分析速度快、样品及试剂用量少等特点，使其成为极为有效的分离技术，广泛应用于分离蛋白质、糖类、核酸等多种物质[6]。 毛细管电色谱是将常规色谱填料填充到毛细管中 , 或在毛细管内表面键合、涂敷固定相 , 以电渗流作为流动相的推动力 , 根据样品中各组分在固定相和流动相间分配系数的差异和在电场中迁移速率的不同而实现分离的一种高效微分离技术。近年来 CEC 在分离分析生物大分子中应用较为广泛。不少研究工作者开始将研究方向转移到CEC分离分析生物大分子。如 Bandilla 等使用整体柱毛细管电色谱分离模型蛋白 , 并表明了蛋白质容量因子随流动相中有机溶剂的增加而增加 , 且获得了高分辨率[7]。CEC 结合了 CE 的高效性和 HPLC 的高选择性 , 是一种新型的微柱分离分析技术 [8], 已成为蛋白质等生物大分子分离分析的方法 , 它的出现为蛋白质的分离分析提供了一条新的有效途径[9]。但目前 CEC 主要是以电驱动流动相为分离模式, 操作中易产生气泡 , 使其受到很大的限制。加压毛细管电色谱 (PEC) 的出现解决了长期限制 CEC 广泛使用的问题 ,PEC克服了仅靠电渗流驱动的一些限制因素 , 可方便地对流动相组成、性质、流速进行调节 , 抑制气泡的形成 , 尤其能实现梯度洗脱 , 是 CEC 发展的重要方向[10]。 3.2色谱技术 色谱法是利用混合物中各组分在两相中分配系数不同，当流动相推动样品 中的组分通过固定相时 ，在两相中进行连续反复多次分