尿素-SDS-PAGE测定小分子多肽相对分子质量方法的建立讲义.docxVIP

尿素-SDS测定小分子多肽相对分子质量方法的建立 王丽荣，程福亮，陈雷，谷巍 （山东宝来利来生物工程股份有限公司， 山东 泰安 271000） 摘要：目的 建立一种简易快速测定小分子多肽相对分子质量的SDS电泳方法。方法通过改进分离胶交联度为6%，丙烯酰胺总浓度为15%，并加入6%的尿素，对所测得的多肽相对分子质量进行线性回归分析。结果 得到的标准曲线线性相关系数r2达到0.9938，测得条带的相对分子质量分别为9.2129KD。结论 本研究建立的方法操作简单、耗时短，且小分子多肽成像清晰，是一种具有很高实用价值的测定方法。 关键字：SDS；小分子多肽；尿素；相对分子质量；转移因子口服液 Development of Urea-SDSMethod for the relative molecular mass of small molecular peptide WANG LI-Rong CHENG Fu-Liang CHEN Lei GU Wei (Shandong BaoLai-LeeLai bioengineering Co. Ltd, Tai an, Shandong, 271000) Abstract: Objective In order to establish a simple and rapid measuring method SDSof the relative molecular mass of small molecular peptide. Method by improving the separation gel, the crosslinking degree was 6%, total acrylamide concentration was 15%, and 6% of urea was added, the relative molecular mass peptides was obtained by linear regression analysis. Results the linear correlation coefficient of the standard curve is 0.9938, and the relative molecular mass of the target protein bands was measured to be 9.2129 KD. Conclusions this study established the method of simple operation, short time consuming, and clear imaging, so, as a kind of measuring method of the relative molecular mass peptides of small molecular peptide, it has a high practical value. Key words: SDS; small molecular peptide; relative molecular mass; urea 蛋白质的生化分析和基因表达产物的分离纯化中，难免会需要分离某种或某些小分子蛋白质成分。近年来，用电泳法测定分子量在几千道尔顿小分子多肽分子量的研究报道较少。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS)方法用作蛋白质大分子量测定的技术最早由Shapiro等人于20世纪60年代建立[1,2]，之后Weber等人进行了改进，显示出了该方法在分离鉴定和纯化蛋白质方面的优越性[3]。20世纪80年代初，Schabgger等[4]应用脲分离蛋白质复合体亚单位的11种蛋白质，进行了系统地研究和摸索，能够分离较大相对分子质量范围内的蛋白质。随着生物技术的飞速发展和基因工程药物的大量涌现，具有高生物活性的小分子多肽的分离、纯化和鉴定已显得尤为突出，而小分子多肽分子量的测定，目前多采用Tricine-SDS系统[5,6,7]，但系统中的Tricine价格昂贵，电泳时间较长，且由于小分子多肽相对分子质量小，易受电泳缓冲系统、凝胶浓度、电泳时间、染色和脱色等的影响，极易引起条带扩散、不易着色，使分辨率降低，因而直接影响多肽分子量的测定。现有多肽分子量的三层胶电泳测定方法操作复杂，且结果也不理想。报道也有张晓楠等[8]采用尿素SDS法快速测定了Mr为2500～17000的多肽，郭燕捷等[9]和石继红等[10]也分别对小分子肽类进行了测定。Kyte等[11]发现由25～250个残基组成的多肽可用含有8mol/ L尿素和0.1%SDS的20%PAGE来分离。 转移因子(TF)属于淋巴因子，可特异或非特异性地调节机体免疫状态、