仪器分析课件8.1 分子荧光法.ppt

第八章 分子发光分析法 8.1.1 荧光与磷光的产生过程 8.1.2 荧光光谱 8.1.3 荧光光谱的基本特征 8.1.4荧光的产率与分子结构的关系 8.1.5 影响荧光强度的因素 8.1.6 仪器与结构流程 8.1.7 荧光分析方法与应用 8.1.1 分子荧光与磷光产生过程 2.电子激发态的多重度 3.激发态→基态的能量传递途径 非辐射能量传递过程： 辐射能量传递过程： 8.1.2 荧光光谱 （2）激发光谱 （3）同步荧光光谱 同步扫描可采取三种方式进行： 同步荧光光谱的特点： (4) 三维荧光光谱 8.1.3 荧光光谱的基本特征 镜像规则的解释: 8.1.4 荧光的产率与分子结构的关系 2.化合物的结构与荧光 8.1.5 影响荧光强度的因素 4.内滤光作用和自吸现象 5.溶液荧光的猝灭 8.1.6 仪器与结构流程 仪器光路图 仪器框图 同步扫描技术 可获得三维光谱图的仪器 8.1.7 荧光分析方法与应用 2.定量依据与方法 （2）定量方法 3.荧光分析法的应用 内容选择 标准曲线法： 配制一系列标准浓度试样，测定荧光强度，绘制标准曲线，再在相同条件下测量未知试样的荧光强度，在标准曲线上求出浓度。 比较法： 在线性范围内，测定标样和试样的荧光强度，比较。 (1)无机化合物的分析 与有机试剂配合物后测量，可测量约60多种元素。 铍、铝、硼、镓、硒、镁、稀土常采用荧光分析法； 氟、硫、铁、银、钴、镍采用荧光熄灭法测定； 铜、铍、铁、钴、锇及过氧化氢采用催化荧光法测定； 铬、铌、铀、碲采用低温荧光法测定； 铈、铕、锑、钒、铀采用固体荧光法测定。 (2)生物与有机化合物的分析 见表。 第一节 分子荧光法 Molecular luminescence analysis molecular fluorescence 由分子结构理论，主要讨论荧光及磷光的产生机理。 1. 分子能级与跃迁 分子能级比原子能级复杂。 在每个电子能级上，都存在振动、转动能级。 基态(S0)→激发态(S1、S2、激发态振动能级)：吸收特定频率的辐射；量子化；跃迁一次到位。 激发态→基态：多种途径和方式(见能级图)；速度最快激发态寿命最短的途径占优势； 第一、第二、…电子激发单重态 S1 ，S2 ，… 。 第一、第二、…电子激发三重态 T1 ， T2 ，… 。 电子激发态的多重度：M = 2S + 1 S为电子自旋量子数的代数和(0或1)； 平行自旋比成对自旋稳定(洪特规则)，三重态能级比相应单重态能级低； 大多数有机分子的基态处于单重态； S0→T1 禁阻跃迁； 通过其他途径进入 (见能级图)； 进入的概率小。 电子处于激发态是不稳定状态，返回基态时，通过辐射跃迁(发光)和无辐射跃迁等方式失去能量。 传递途径 辐射跃迁 荧光 延迟荧光 磷光 内转移 外转移 系间跨越 振动弛预 无辐射跃迁 激发态停留时间短，返回速度快的途径，发生的概率大，发光强度相对大。 荧光：10-7～10 -9 s，第一激发单重态最低振动能级→基态； 磷光：10-4～10s，第一激发三重态最低振动能级→基态。 振动弛豫：同一电子能级内以热交换形式由高振动能级至低相邻振动能级间的跃迁。发生振动弛豫的时间10 -12 s。 内转换：同多重态电子能级中，等能级间无辐射能级交换。 通过内转换和振动弛豫，高激发单重态的电子跃回第一激发单重态的最低振动能级。 外转换：激发分子与溶剂或其他分子之间产生相互作用而转移能量的非辐射跃迁。 外转换使荧光或磷光减弱或“猝灭”。 系间跨越：不同多重态有重叠转动能级间的非辐射跃迁。 改变电子自旋，禁阻跃迁，通过自旋-轨道偶合进行。 S2 S1 S0 T1 吸 收 发 射 荧 光 发 射 磷 光 系间跨越 内转换 振动弛豫 能 量 l 2 l 1 l 3 外转换 l ?2 T2 内转换 振动弛豫 荧光发射： 电子由第一激发单重态的最低振动能级→基态(多为 S1→ S0跃迁)，发射波长为 ??2的荧光； 10-7～10 -9 s 。 发射荧光的能量比分子吸收的小，波长长； ??2 ? 2 ? 1 ； 磷光发射： 电子由第一激发三重态的最低振动能级→基态(T1 → S0跃迁) S0 →激发→振动弛豫→内转移→系间跨越→振动弛豫→ T1 发光速度很慢： 10-4～100 s 。 光照停止后，可持续一段时间。 两个特征光谱：激发光谱和发射光谱。 同步荧光光谱