2016高考生物二轮复习课件：第7单元专题1基因工程与细胞工程(江苏专用)(人教版)资料.pptVIP

②将重组细胞在________条件下做大规模培养或注射到小鼠________内增殖，以获得大量单克隆抗体。 (3)也有人提出，可以直接通过基因工程导入该调控基因(prG)来制备单克隆抗体，其思路如下图所示。 ? ①酶A是指________，酶B是指________。 ②图中I表示________，对Ⅱ进行检测与鉴定的目的是__________ ________________________________________________________， Ⅲ所指细胞具有的特点是__________________________________。 解析　(1)动物细胞融合技术最重要的用途就是制备单克隆抗体，常用聚乙二醇、灭活的病毒、电激等诱导因素诱导细胞融合。再经多次筛选和细胞培养获得足够数量的能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。 (2)①取特定抗原刺激的B淋巴细胞的细胞核，移植到去核的骨髓瘤细胞中，因为骨髓瘤细胞的细胞质中有无限增殖调控基因(prG)，构成重组细胞。 ②将重组细胞在体外条件下大规模培养或注射到小鼠腹腔内增殖，以获得大量单克隆抗体。 (3)②图中Ⅰ表示目的基因(无限增殖调控基因或prG)，对Ⅱ进行检测与鉴定的目的是检测目的基因是否导入和是否表达，Ⅲ具有的特点是既能无限增殖，又能产生特定抗体。 答案　(1)动物细胞融合　灭活的病毒　杂交瘤 (2)①特定抗原刺激的B淋巴　无限增殖　②体外　腹腔 (3)①限制性核酸内切酶　DNA连接酶　②目的基因(无限增殖调控基因或prG)　检测目的基因是否导入和是否表达　既能无限增殖，又能产生特定抗体 动物细胞融合与单克隆抗体制备的归纳 (1)制备单克隆抗体时选用一种抗原处理的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，产生杂交瘤细胞，杂交瘤细胞兼有两个亲本细胞的特性——在体外培养条件下能不断增殖，同时能产生出某种特异性的抗体。 (2)进行动物细胞的诱导融合，形成的杂种细胞有三种：AA型、BB型、AB型。只有AB型才是我们所需要的杂种细胞，所以需要用选择性培养基进行筛选。 (3)单克隆抗体制备过程中的两次筛选 第一次筛选：利用特定选择培养基筛选，获得杂交瘤细胞，即AB型细胞(A为浆细胞，B为骨髓瘤细胞)，筛选掉A、B、AA、BB型细胞。 第二次筛选：利用多孔板法和抗原—抗体杂交法筛选，获得产生特定抗体的杂交瘤细胞。 (4)将正向连接的表达载体导入神经干细胞后，为了检测GDNF基因是否成功表达，可用相应的________与提取的蛋白质杂交。当培养的神经干细胞达到一定密度时，需进行________培养以得到更多数量的细胞，用于神经干细胞移植治疗实验。 解析　(1)动物细胞间的物质主要成分是蛋白质，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理一段时间，目的是使组织中的细胞分散成单个细胞。 (2)据图1可知，GDNF基因两端和载体上都有Xho I限制酶的酶切位点。 (3)据图1可知，用Hpa I和 BamH I限制酶对三种载体进行酶切，单个载体自连只有Hpa I限制酶的酶切位点，得到6 000 bpDNA的片段；正向连接重组载体有Hpa I和 BamH I限制酶的酶切位点，得到700 bpDNA的片段和6 000 bpDNA的片段；反向连接重组载体有Hpa I和 BamH I限制酶的酶切位点，得到200 bpDNA的片段和6 500 bpDNA的片段。 (4)检测目的基因是否成功表达，可采用抗原－抗体杂交法。培养的原代细胞贴满瓶壁重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖，这样的培养过程通常称为传代培养。传代培养的细胞一般传至10代后就不易传下去，科研上使用的正常细胞通常为10代以内，以保持细胞正常的二倍体核型。 答案　(1)使细胞分散开　(2)Xho I　(3)②　(4)抗体　传代 1.区分DNA连接酶和DNA聚合酶、限制性核酸内切酶和解旋酶 (1)DNA连接酶连接两个DNA片段，而DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸添加到脱氧核苷酸链上。 (2)限制性核酸内切酶是切割某种特定的脱氧核苷酸序列，并使两条链在特定的位置断开，而解旋酶是将DNA的两条链间的氢键打开形成两条单链。 2.启动子≠起始密码；终止子≠终止密码 3.根据受体种类确定基因工程的受体细胞： (1)植物：植物体细胞或受精卵 (2)动物：受精卵或体细胞 (3)微生物：细菌。 注：目的基因导入受体细胞不是基因工程成功的标志，基因工程是否成功在于目的基因是否成功表达。 题组2　综合考查基因工程的应用及蛋白质工程 1.(2013·江苏单科，22)小鼠杂交瘤细胞表达的单克隆抗体用于人体试验时易引起过敏反应，为了克服这个缺陷，可选择性扩增抗体的可变区基因(目的基因)后再重组表达。下列相关叙述正确的是(多选)(　　) A.设计扩增目的基因的引物时不