实验六酸性磷酸酶的显示分析.pptx

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2016-11-26 发布于湖北
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实验六酸性磷酸酶的显示分析.pptx

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酸性磷酸酶（ACP）的显示;实验目的：;实验原理：; 酸性磷酸酶（acid phosphatase，ACP）主要存在于巨噬细胞，定位于溶酶体内。在溶酶体膜稳定完整时，底物不易渗入，ACP活力微弱或无活性，经固定，在合适pH条件下，膜本身变为不稳定，逐渐改变其渗透性，底物可以渗入，酶活力被显示。; ACP在酸性条件下（pH4.7）可使作用液中的底物β-甘油磷酸钠的磷酸根解离出来，进而与溶液中硝酸铅结合形成磷酸铅沉淀，因其是难溶解的无色沉淀物，需要与黄色的硫化铵作用，生成棕黑色PbS沉淀而被显示出来。;实验用品;实验步骤;颈椎脱臼处死小鼠。;吸取少量腹腔液，在玻片上涂层一薄层，室温晾干。;将涂片滴置于冰盒中，滴加适量ACP作用液，37℃作用30分钟。取出后，蒸馏水漂洗。用10%甲醛钙溶液后固定5min。;玻片入2%硫化胺溶液作用2～3min，进行显色。取出后蒸馏水漂洗，镜检。;对照实验;实验结果;实验作业