宫颈细胞HPV16病毒DNA甲基化宫颈病变相关性研究.pdfVIP

缩略词表 宫颈细胞HPVl6病毒DNA甲基化与宫颈病 变相关性研究 中文摘要 研究背景和目的： 染是宫颈癌的主要病因。表观遗传学事件在癌症的发生过程中起着重要的作用，几 乎所有的癌症类型均表现出异常的甲基化状况，且涉及全基因组。本研究旨在分析 临床样本中HPVl6病毒长控制区增强子(LCREnh锄cer)和E6基因启动子(E6 37、43、52、58)的甲基化图谱，结合患者的临床资料，分析病毒DNA甲基化程 度差异与临床病变程度的相关性，初步探讨甲基化程度差异与宫颈癌发生发展的关 系，为今后从分子生物学、表观遗传学角度阐明HPV致病机制，进而预测患者宫 颈病变的进展及预后等相关问题提供研究基础。 研究方法和步骤： 的宫颈病变及常规妇科检查的患者，一共收集TCT标本324例，其中HPV感染244 例，用多对引物PCR扩增分型后确定单一型别HPV感染146例，混合感染98例。 例)。在对原始标本提取DNA后，从单一邯V16感染中选择26例、从混合感染中 选择4例(HPVl6感染为主，细胞学诊断均为正常)，总计30例样本纳入全程研究。 另从医科院基础所细胞中心购得SiHa细胞系l株作为平行对照。SCC组全部病例 和HSIL组部分病例有北京协和医院病理科的病理诊断。 从原始样本中提取DNA，然后用试剂盒对提取的DNA行重亚硫酸盐修饰，再 用BSP引物PCR扩增目的片段，在电泳验证目的片段存在后，将PCR产物质粒转化 E．．coli克隆，随机挑取数个克隆，对目的片段进行测序，从而确定目的片段中每一 个CpG位点的甲基化状况。 ．4． 采用描述性和图表的方法来汇总分析数据，根据图谱可以直观的反映出CpG位 13．0 点的甲基化频率。同时采用SPSSfor咖dows统计软件分析数据。组间甲基化 率差异比较用FiSher精确概率检验，Po．05有统计学意义。各位点的甲基化率用 student’st检验，显著高于O(与O比较P0．05)有统计学意义。 结果： 发生甲基化，总体甲基化率为4．4％。在11个CpG位点中，位点7533、7551、 位点31、37、43、52、58的总体甲基化率约为8％。 点上发生了明显的甲基化，7674位点甲基化率约为8％，余各位点甲基化率在 20％以上，均显著高于O(Stud朗t’s 甲基化率差异显著(PO．0l，FiSher精确概率检验)。 3、正常组和LSlL组甲基化现象罕见，但由于样本量限制，正常组／LSIL组与HSlL 组／SCC组间无法进行有意义的统计学比较。 4、测定了l株SiHa细胞的5个拷贝的甲基化情况，在LCRE11llancer序列的5个 位点有甲基化发生。 结论： 很低；在E6 7862位点的甲基化率低。 2、绝大多数的甲基化发生在SCC组，SCC组与HSIL组相比甲基化率有显著差异。 3、正常组和LSIL组中罕见甲基化发生。 4、在S讯a细胞系中的HPVl6病毒基因组的甲基化型别具有异质性。 关键词：宫颈癌HPv甲基化cpG二核苷酸 Abstract and BackgroundObjectiVes： Cervialc锄cerisoneoftllemostcommon alloVert11eworld． gynecologicmaligllancy haSadirect withcervicalcanc既 H啪锄p印illomaVillls(HPV)infectionrelationship events r01einthe ofcancer．Wec锄find Epigeneticplay觚illlponamtdeVolopment abnomal inalmost ofc孤cer锄d iIlVolVest11e metllylationpanems all帅es metllylation