酪氨酸羟化酶基因多态性精神疾病关联性及法医学和人类遗传学意义.pdfVIP

目 的 PCR)技术，选择存在 本研究采用DNA测序和实时荧光定量PCR(Realtime 于人类TH基因外显子3和内含子9上的两个SNP位点进行调查，针对辽宁地区的 精神病患者及部分家系，通过分析与精神疾病密切相关的脑神经递质TH基因的多 态性，并与正常群体进行比较，探讨这一易感基因与精神疾病的相关性以及其在 人类遗传学中的意义。同时通过对TH基因位点SNP的高通量系统分析，计算获得 的有关法医学应用参数，为其在法医学中的应用奠定基础。 材料与方法 1、样品 1．1中国北方汉族127例无血缘关系健康个体静脉抗凝血由中国医科大学法 医学院法医血清学教研室提供。 1．2173例尼泊尔国藏族人DNA样品由日本国久留米大学医学部法医人类遗传 学教室友好提供。 1．3130例日本福冈地区健康日本人DNA样品由日本国久留米大学医学部法 医人类遗传学教室友好提供。 1．4133例居住在中国北方的患有精神疾病的血液样品，以及7例患有精神疾 患的家系血液样品均由辽宁开原精神病医院提供。 1．573例居住在中国北方的抑郁症患者的DNA样品由中国医科大学心理学教 研室友好提供。 2实验方法 2．1模板DNA制备采用酚／氯仿法抽提DNA。 2．2PCR扩增目的DNA片段： G334A引物序列： 2 F：5’-CAGCGCGGCTCCAGCCCGT一3’，R：5’一AGTCCCGGGCGGACAGCAGGC一3’： C5162G引物序列： F：5’一CAGTGCACCCAGTATATCCG一3’，R：5’一CCGTCGCACCCCCCACCCTC一3’。 2．3 Terminatorv3．1 DNA测序：测序PCR反应应用BigDye CycleSequencing Kit和ABI3130全自动序列测定分析仪。测序用引物序列：TH-exonlO—L： 2．4统计学处理方法 由试验所得的数据依照参考文献计算出基因型频率、等位基因频率和杂合度， 同时与实际调查所获得的基因型频率之间进行检验，验证是否符Hardy—Weinberg 定律。以上数据均利用SPSS统计软件包进行计算分析。 勿七 甲 三日 木 1、人类TH基因突变的命名 本研究在分析人类丛!QQ鱼至§Z的基因组Contig的同时，确定出了TH的基因组 结构。研究结果显示所分析鉴定的两个突变点分别定位于外显子3中的第7个碱 基对(G／A)和内含子9中的第8个碱基对(C／G)，依据美国立生物技术信息中 C5162G。 2、G334A和C5162G两位点的群体学分布数据 在G334A位点，三个调查的群体中均存在CC、CT和TT三种基因型。两种常 见的等位基因频率为C=日本人中国北方汉族尼泊尔藏族(即 基因型，但均没有检出GG基因型，说明后一种基因型在东亚及靠近东亚的群体中 3 可能相当罕见。两种常见的等位基因频率为C=日本人中国北方汉族尼泊尔藏族 0．0780．0390．023)。 3、G334A和C5162G两位点数据的法医学意义 ofdiscrimination 个人识别机率(Probability power，DP)在G334A位点 of 率(Excludingprobability 藏族中国北方汉族日本人(即0．15610．07870．0462)。 4、G334A位点在精神疾病和抑郁症患者中的分布 中国北方地区精神疾患群体G334A位点的基因频率分布为：C=0．133，T= 0．867；忧郁症群体的基因频率分布为：C=0．116，T=0．884。 5、C5162G位点在精神疾病和