Tyro+3家族受体精子发生.pdfVIP

中田协和墨：年中大掌中田矗：掌科掌院博士掌位论文 中文摘要 Tyro3家族受体由三个成员组成，即Axl，Tym3，和Mer。有报道称三个成员 纯合突变的雄性小鼠完全丧失了生殖能力，然而它们调节精子发生的机理仍一无所 3家族受体调节精子发生的机理。 知。本研究的重点为Tyro 首先，利用免疫组织化学和免疫细胞化学技术对Tyro3家族受体成员及其它们 的共同配体G耶6在小鼠出生后睾丸发育中的表达和定位进行了系统研究。结果显示 3只表达于sertoli细胞，其分布随 所有三个受体及其配体均在小鼠睾丸中表达。1姐o 睾丸的发育而变化。在出生后3天到l周，Tyro3分布于整个Senoli细胞胞浆和胞 膜；在生后2到5周，Tyro3主要定位在Sertoli细胞近腔室包绕生殖细胞的突起上； 在成年睾丸，Tyro3的表达呈现阶段依赖性变化：在I一Ⅷ期的曲细精管表达较强， 3相似。但在成年睾丸的 而Ⅸ一Ⅻ期的曲细精管表达较弱。A)【1的表达模式与Tyro 而在senoli细胞中表达较弱。Gas 6在Leydig细胞中呈强阳性表达，而在原始的精 原细胞和Scnoli细胞中呈弱阳性表达。利用RT_PcR方法检测Tyro3家族受体在原 代培养的不同周龄的senoli细胞中的表达显示，Axl和Tyro3呈高表达，且随着 改变。明确T)∞3家族受体及其配体在睾丸中的表达为进一步研究它们在调节精子 发生中的功能奠定了基础。 3家族受体基因敲除小鼠为模型， 3家族受体敲除后 其次，利用1Wo 对研o 对精子发生的影响进行研究。基因敲除雄性小鼠与正常雌性小鼠的交配实验表明：单 生育能力，但出现不同程度的降低：当三个基因全被敲除(ATM)后，其生育能力则完 全丧失。 对睾丸发育及精子发生的分析发现： 删小鼠的睾丸重量明显低于正常 鼠：附睾中除了少量、畸形、活动度低下的精予外，多为圆形的未发育成熟的生殖细 胞；从3周开始出现生精上皮组织紊乱，部分圆形的生殖细胞脱落进入附睾管，5周 时生精上皮出现许多变性的生殖细胞和双核精子细胞，从8周开始，许多空泡和合胞 1 中田协和矗：年串夫掌中豳置：掌科掌院博士掌位论支 体出现于生精上皮，所有这些表型随着年龄的增加而加重，在15周，生精小管中精 予细胞的数量明显减少，许多生精小管中只残留少量的生殖细胞，很少看到16期 色发现在青春期以后，生殖细胞的凋亡明显增加，且主要出现在后期的精子细胞。除 了生精细胞外，ATM小鼠Sertoli细胞的表型及功能也发生了明显的变化：空泡化是 a咖bul证，vimen曲) 其一个明显的表型：Senoli细胞的细胞骨架(D．actin，tyrosinated 结构紊乱；超微结构显示在sen01i细胞与精子细胞接触部位形成的由Sen01i细胞膜、 肌动蛋白微丝、内质网膜构成的外浆特化区(ectoplasmic 显破坏； 体外黏附实验证实ArM小鼠Senoli细胞与生殖细胞间的黏附能力明显下 降，这种黏附能力的下降归因于Senoli细胞，而非生殖细胞；ATM小鼠senoli细 TGF B1的表达呈不同程度的下降。这些结果表明Tyro3家族受体成员通过相互间协 同作用，调节Senoli细胞的功能，进而影响精子的发生。 Red 另外，本论文建立了利用油红O(OilO)染色评价sertoli细胞吞噬功能的体外 方法。利用这一方法发现：吞噬细胞中脂滴的形成与被吞噬的凋亡细胞类型有关，而 与吞噬细胞本身无关：出生后不同发育阶段的senoli细胞具有相似的吞噬能力；Tyro 3家族受体基因敲除后， Sen01i细胞的吞噬能力明显下降。该体外模型可能是研究 Sen01i细胞吞噬功能以