旁分泌的Wingless与UPD%2fJAK%2fSTAT信号通路控制果蝇中肠干细胞的自我更新.pdfVIP

………．39 ………．39 Situ 3．3．7原位杂交(InHybridization)…．：…………………．40 3．3．8图像采集及数据分析…………………………………．．44 4．结果……………………………………………………．．46 4．1旁分泌的Wingless信号控制果蝇肠道干细胞的自我更新…………．．46 4．1．1 wg特异的在环形肌细胞表达……………………………．46 4．1．2 Wg对ISC自我更新和增殖是必需的………………………．48 4．1．3 Wg以旁分泌的方式起作用………………………………48 4．1．4经典的Wg信号通路下游组分以细胞自主性的形式维持干细胞……49 4．1．5 Wg信号通路不影响下游谱系的分化………………………．51 4．1．6 Wg信号通路的活化导致ISC和EB有限的扩增………………．53 4．1．7 Wg和Notch信号通路在调节ISC上的上下游关系……………．54 4．2旁分泌的Upd信号通过JAK／STAT通路调控果蝇肠道干细胞的自我更新和谱系 分化………………………………………………………55 4．2．1 Upd特异的在肌肉细胞中表达……………………………55 4．2．2 JAK／STAT信号通路在ISC，EB和肌肉细胞中激活……………．55 4．2．3 Upd对ISC的维持和增殖是必需的………………………．．56 4．2．4 4．2．5经典的JAK／STAT信号通路下游成员以细胞自主性的形式来维持干细胞 的干性和增殖能力…………………………………………．58 4．2．6 JAK／STAT通路对肠道谱系的分化也是必需的………………．．60 4．2．7 JAK／STAT和Wg信号通路平行地调控ISC维持和增殖…………．61 4．2．8 JAK／STAT信号通路的活化导致ISC有限扩增和ee细胞明显增多…62 4．2．9 JAK／STAT和wg信号通路共激活协同促进ISC自我更新………．．63 4．2．10 JAK／STAT和Notch信号通路的遗传学关系…………………64 5．结论……………………………………………………．．66 6．讨论……………………………………………………．．67 参考文献……………………………………………………71 致谢………………………………………………………．81 验结果表明经典的wnt和JAK／STAT信号通路共同控制ISC的自我更新。Wnt信号通 路的配体Win91ess(Wg)特异的在包裹肠道的肌肉细胞里表达，Wg从肌肉细胞中 分泌出来，穿过基底膜到达ISC，激活ISC里经典的Wnt信号通路来调节ISC的自 我更新。wg功能缺失导致ISC增殖变慢并通过分化丢失。谱系标记分析显示Wg信 对ISC的自我更新是必需的。Wg信号通路过度激活产生更多的类似ISC的细胞和 用，促进ISC及子细胞的分化。Wg和Notch信号通路互相拮抗控制ISC自我更新和 分化的平衡。此外，我们还发现JAK／STAT信号通路的配体Upd也特异的在肌肉细 胞里表达，并且对ISC的维持是必需的。Upd作为另一个旁分泌信号，在ISC里激 活经典的JAK／STAT信号级联反应，来调节ISC的自我更新和分化。JAK／STAT信号 通路下游组分的功能缺失导致ISC静止并通过分化丢失，JAK信号通路的过度激活 产生更多的类似ISC的细胞和EB细胞。同时阻断或激活JAK／STAT和Wg信号通路 分别导致更强的ISC丢失或者ISC聚集的表型，表明这两个信号通路平行并协同起 作用。此外，JAK／STAT信号通路的缺失阻断EB分化，而且降低JAK通路的活性优 先抑制ee细胞的分化。相反，JAK过度激活产生额外的分化细胞，尤其是ee细胞。 自我更新，JAK／STAT和Notch信号通路相拮抗的活性控制EC和ee细胞的平衡。本 实验表明中肠周围包裹的肌肉细胞作为ISC的微环境(niche)