第4章 电泳技术.pptVIP

第六节 免疫电泳 火箭免疫电泳(RIE) 实验原理： 在含抗体的琼脂板一端打一排抗原孔；加入待测标本后，将抗原置阴极端，用横距2～3mA/cm的电流强度进行电泳。抗原泳向阳极，在抗原抗体比例恰当处发生结合沉淀。随着泳动抗原的减少，抗原泳动的基底区越来越窄，抗原抗体复合物形成的沉淀线逐渐变窄，形成一个状如火箭的沉淀峰。 第六节 免疫电泳 火箭免疫电泳(RIE) 图 6-16 Laurell 技术示意图及火箭免疫电泳图谱 Ag：抗原；1、2、3为待测标本；4、5、6为标准 第六节 免疫电泳 火箭免疫电泳(RIE)－－检验医学中的应用 火箭电泳放射自显影定量甲胎蛋白 图 6-17 火箭电泳放射自显影定量检测AFP图谱 第六节 免疫电泳 火箭免疫电泳(RIE)－－检验医学中的应用 血清脂蛋白ApoA1和ApoB火箭电泳 图 6-18 血清脂蛋白ApoA1和ApoB火箭电泳分析图谱 1、2、3、4、5示标准；6、7、8示待测标本 第六节 免疫电泳 免疫电泳(IEP )技术 是区带电泳与免疫双扩散相结合的一种免疫化学分析技术。 第六节 免疫电泳 免疫电泳(IEP)技术－－基本原理 第六节 免疫电泳 免疫电泳(IEP )技术－－检验医学中的应用 表1 血浆免疫电泳各区带所含蛋白成分 Alb α1 α2 β γ 前白蛋白 白蛋白 α1-抗胰蛋白酶 α1-酸糖蛋白 α1-抗糜蛋白酶α1-脂蛋白 甲胎蛋白 触珠蛋白 铜蓝蛋白 α2-巨球蛋白 转铁蛋白 C3、C4 β脂蛋白 β2-微球蛋白 纤维蛋白原 C反应蛋白 免疫球蛋白 第六节 免疫电泳 第六节 免疫电泳 免疫固定电泳(IFE)－－检验医学中的应用 图 6- 21 血清免疫固定电泳图 左：IgA-κ型M蛋白；右：双M蛋白（IgG-κ、IgA-κ） 第六节 免疫电泳 免疫固定电泳(IFE)－－技术优势 周期短 敏感性高 分辨率好 结果易分析 第七节 高效毛细管电泳技术 基本原理 电 渗 流 电 流 蛋白泳动 － + 电 源 检 测 器 泳 动 温 度 控 制 器 缓冲液 + － 缓冲液 图 6-23 高效毛细管电泳原理图 第七节 高效毛细管电泳技术 高效毛细管电泳的分离模式 毛细管区带电泳 (capillary zone electrophoresis, CZE) 毛细管凝胶电泳（capillary gel electrophoresis, CGE） 胶束电动力学毛细管色谱（micellar electrokinetic capillary chromatography, MECC) 等电聚焦电泳（isoelectric focusing, IEF) 等速聚焦电泳 (isotachophoresis, ITP) 毛细管电色谱（capillary electrochromatography, CEC） 亲和毛细管电泳（affinity capillary electrophoresis, ACE） 电动色谱(electrokinetic chromatography, EKC) 非水相毛细管电泳（non-aqueous capillary electrophoresis, NACE） 第八节 电泳分析仪 电泳分析仪的基本结构 电源 可分为稳流、稳压、稳功率 电泳槽 电泳区带分析装置 第八节 电泳分析仪 半自动电泳分析仪 图 6-26 HELANA半自动电泳分析仪 第八节 电泳分析仪 全自动电泳分析仪 图 6-27 Sebia全自动电泳仪 谢 谢 思考题 1.二维电泳中，分别是哪二维电泳，分别根据蛋白质的什么性质进行分离？ 2.免疫印迹法分哪几个步骤？ 医用检验技术及应用 电泳技术 电泳技术 目 录 第一节 区带电泳 第二节 等电聚焦电泳 第三节 SDS电泳 第四节 二维电泳 第五节 印迹技术 第六节 免疫电泳 第七节 高效毛细管电泳技术 第八节 电泳分析仪 基本原理 不同性质的质点，由于带电性质及电量不同，在一定电场强度下移动的方向和速度亦不同。 蛋白质分子为两性电解质 等电点 pH等电点 带负电 pH等电点 带正电 质点所带净电荷量越多（介质的pH值离等电点越远） 质点的直径越小 越接近球形 则它在电场中的泳动速度越快，迁移率亦越大。 基本原理 区带电泳 检验医学中的应用－－血清蛋白电泳 图 6-1 正常血清蛋白电泳图谱 上图：箭头示电泳方向，右侧示各条带的主要组分； 下图：光密度扫描后电泳图谱；HP：触珠蛋白；CP：铜蓝蛋白 Alb：清蛋白 α1：α1酸性糖蛋白、α1抗胰蛋白酶 α2：HP