微生物学地研究与应用论文技术.docxVIP

Module 1：微生物学研究与应用技术 一 、PCR技术 1、PCR原理：PCR技术是以DNA双链的复制和变性、复性为原理，在人工调控的温度下，提供DNA复制所需的引物、模板、dNTPs、聚合酶等条件，从而使得DNA可周而复始的进行复制扩增。 2、PCR循环（步骤）：变性（denaturation）—退火（annealing）—延伸（extension）； 变性：高温下，模板DNA发生热变性，双链解开成两条单链； 退火：反应体系降温，使引物与模板DNA两端的碱基配对； 延伸：DNA聚合酶使引物3’端向前延伸合成新链； 新合成的单链又可作为下一轮循环的模板进行复制，并不断重复上述的3个步骤，使得DNA片段呈指数增长，在1h内可重复25~30次，DNA的扩增量可达106~107倍。 3、PCR常用的耐热聚合酶：（1）Taq DNA聚合酶，耐高温但缺乏校正功能，使用最为广泛；（2）Pfu DNA聚合酶、Vent DNA聚合酶，既耐高温又具有校正功能的聚合酶； （3）Tth DNA聚合酶，具有逆转录活性的聚合酶，可使RT-PCR在同一体系中进行，即使仅有极少量的RNA也可被扩增，可用于研究细胞RNA和RNA病毒。 4、PCR的应用：（1）可用于基因的扩增和制备DNA探针，如已知目的基因两端的序列，利用PCR便可将其扩增出来，也可用于定位诱变和DNA测序；（2）可用于临床医学上检测传染病、