分子遗传学——陈锋分析.pptxVIP

分子遗传学;细胞转染技术简介;细胞转染技术的分类及目的;细胞转染的方法;生物学方法;化学法——磷酸钙法;化学法——DEAE－葡聚糖法;化学法——脂质体介导的转染法;脂质体介导的细胞转染包括两个步骤，首先是脂质体与DNA 形成复合物，然后介导与细胞作用，将 DNA 释放到细胞中。;化学法——脂质体介导的转染法;化学法——阳离子聚合物转染法;化学法——阳离子聚合物转染法;化学法——阳离子聚合物转染法;PBAE作为转染载体的优点：;物理法——显微注射法;应用举例:此法已成功运用于包括小鼠、 鱼、 大鼠、 兔子及许多大型家畜，如牛、 羊、 猪等基因转殖动物。;物理法——基因枪法;应用举例：UchidaM 等应用基因枪技术将 GFP 质粒转染 HEK 293, MCF7 andNIH/3T3 细胞，发现其转染效率取决于基因枪内氦气的压力、金属颗粒球的大小、 数量、 DNA 的量；对细胞的损伤程度取决于氦气压力和金属离子的数量。 ;基因枪技术的优缺点：;物理法——电穿孔法;应用举例：;物理法——声孔介导的转染法;物理法——激光介导的转染法;物理法——磁性纳米颗粒介导的转染法;英国NonoTherics公司的Magnefact高效细胞转染系统;Magnefect高效细胞磁性转染系统配合NanoTherics公司提供的nTMag（图2），一种高效率的核酸转染磁性纳米颗粒系统，可以完成与质 粒DNA，反义寡核苷酸，siRNA的或蛋白质的联合使用。nTMag磁性粒子表面用多聚阳离子进行表面修饰。由于它们带有阳性电荷易于和有阴性电荷的 DNA结合，无论与病毒或其它非病毒载体相比磁性转染转染效率提高几十到几千倍。;nTMAG-DNA复合物的形成过程：;nTMag磁性纳米颗粒是一类智能型的纳米磁性材料，既具有纳米材料所特有的性质如粒径小，比表面极大，偶连容量高，又具有磁响应性及超顺磁性，可以在恒定磁场下聚集和定位、还可以在交变磁场下吸收电磁波产热。 nTMag 磁性粒子表面用多聚阳离子聚合物进行表面修饰，这种磁性纳米颗粒具有很强的结合和浓缩DNA的能力，这主要是因为多聚阳离子聚合物富含易于被质子化的氨基 而携带大量的正电荷，可以通过静电作用与带负电荷的DNA结合，因此磁性纳米颗粒具有很强的结合、浓缩与保护DNA的能???。 磁性纳米颗粒具有很强 的保护DNA的能力，可以保护DNA免受核酸酶的降解作用。磁性纳米颗粒与DNA是通过静电吸引结合的，这种随机的非特异性相互作用使颗粒与DNA之间形 成紧密的复合物，产生空间位阻效应，阻止DNaseⅠ及Mg2+与DNA的接触，使得DNaseⅠ不能发挥消化活性，因此磁性纳米颗粒具有很好的酶切保护 效果。;通过磁场震荡将nTMag-DNA 粒子吸附于细胞表面。;nTMag-DNA 粒子在细胞表面移动产生的机械刺激增加了细胞的内吞作用，结果使得nTMag–DNA粒子进入细胞释放到细胞质。 DNA可以被扩散到核酸，可以被转录翻译成基因产物。;该magnefect-nano-II细胞转染系统提供有6孔，24孔和96孔磁体阵列，可完全互换，允许用户灵活使用。配备全面控制软件nanofect，可以调整转染参数（振荡频率，位移，周期，时间）。;细胞转染技术展望;参考文献;谢 谢！