2015.沙门氏菌检测.docVIP

现代食品检验实验 实验指导书 食品科学与工程实验室 徐君飞 食品中沙门氏菌的荧光抗体检验 一、目的与要求　 1．学习和掌握免疫荧光检测技术的原理。 2．初步掌握免疫荧光检测技术的操作方法和检测结果的判定。 二、实验原理　 抗体与荧光素结合后，并不影响其和相应抗原发生特异性结合反应，事先将待测抗原固定于载玻片上，滴加荧光标记抗体，若荧光标记抗体与相应抗原发生特异性结合反应，不能被缓冲液冲掉，在荧光显微镜下可观察到荧光，否则，荧光抗体被缓冲液冲掉，在荧光显微镜下观察不到荧光。 三、仪器与试剂　 1．载玻片 76×26mm，厚 0.81.0mm，事先刻好 4×2 个小方格，并编号。先用洗涤剂彻底洗净油污，经滴检察证实无油污，再浸于 95%酒精中备用。 2．盖玻片 22×22mm，厚 0.130.17mm，同上洗净，浸于 95%酒精中备用。 3．荧光显微镜。 4．溶液与试剂 磷酸盐缓冲生理盐水：0.01m(pH9.0)PBS-0.85%NaCl；固定液：按顺序将无水乙醇 60ml、三氯甲烷 30ml 混匀，再加入 36～38%甲醛 10ml、混匀 4℃ 贮存，重复使用次数以不超过三次为宜； pH 9.0 碳酸盐缓冲甘油：无水 Na2CO3（分子量 105.99）6g、无水 Na2HCO3（84.01）37g 溶于蒸馏水中，加至 100ml，混匀，即成 pH9