第五工业微生物产生菌的分离与筛选分析.pptVIP

冷触媒法 利用气体发生器产生H2及 CO2 2 H2+O2 2 H2O H2O 硼氢化钠-氯化钴合剂 H2 碳酸氢钠-柠檬酸合剂 CO2 催化剂 方法：催化剂（金属钯或铂）、美蓝指示剂、气体发生袋、水 抽气换气法 通过活塞将罐内空气用真空泵抽尽，充入N2，反复抽气与充气3次，最后充入含80%N2、10%H2、10%CO2的混合气体 触媒（钯粒）、美蓝指示剂 厌氧气袋法 原理与冷触媒法相同，将厌氧罐用无毒、透明的塑料袋代替 简单、携带方便、效果也较好 厌氧手套箱培养法 当今国际公认的培养厌氧菌最佳仪器之一 在无氧环境中连续进行标本接种、培养和鉴定等全部工作 其他培养法： 平板焦性没食子酸法 生物耗氧法 庖肉培养基 液体培养基法与高层琼脂培养法等 （四）组织分离法 (1) 对一般有病组织的分离方法 ——是由一些有病组织或特殊组织中分离菌株的方法。如从患恶苗病的水稻组织中分离赤霉菌，从根瘤中分离根瘤菌，及从各种食用的子实体中分离孢子等。 切除小块含菌组织——洗去表面污物——10%漂白粉或0.1%升汞浸泡2—5min，无菌水冲洗——移至平皿上培养——观察菌落——挑入斜面培养——分离纯化、筛选。 从豆科植物的根瘤中分离根瘤菌：取根瘤——10%漂白粉或0.1%升汞浸泡2—5min，无菌水冲洗——用无菌镊子将根瘤压破，取汁液少许与分离培养基混合倒入平皿，摊平，培养——观察菌落——挑入斜面培养。 (2) 食用菌孢子分离法 多孢子分离法 单孢子分离法 （五）单细胞或单孢子分离法 （六）特殊菌类——环保降解菌的分离 二、菌种筛选的手段 1.??从菌体形态分析 2.??平皿快速检测法 平皿快速检测法是利用菌体在特定固体培养基平板上的生理生化反应，将肉眼观察不到的产量性状转化成可见的“形态”变化。具体的有纸片培养显色法、变色圈法、透明圈法、生长圈法和抑制圈法等。这些方法较粗放，一般只能定性或半定量用，常只用于初筛，但它们可以大大提高筛选的效率。它的缺点是由于培养平皿上种种条件与摇瓶培养，尤其是发酵罐深层液体培养时的条件有很大的差别，有时会造成两者的结果不一致。 （1） 纸片培养显色 将饱浸含某种指示剂的固体培养基的滤纸片搁于培养皿中，用牛津杯架空，下放小团浸有3%甘油的脱脂棉以保湿，将待筛选的菌悬液稀释后接种到滤纸上，保温培养形成分散的单菌落，菌落周围将会产生对应的颜色变化。 （2） 变色圈法 将指示剂直接掺入固体培养基中，进行待筛选菌悬液的单菌落培养，或喷洒在已培养成分散单菌落的固体培养基表面，在菌落周围形成变色圈。 在含淀粉的平皿中涂布一定浓度的产淀粉酶菌株的菌悬液，使其呈单菌落，然后喷上稀碘液，发生显色反应。变色圈越大，说明菌落产酶的能力越强。而从变色圈的颜色又可粗略判断水解产物的情况。 筛选果胶酶产生菌时，用含０.2％果胶为唯一碳源的培养基平板，对含微生物样品进行分离，待菌落长成后，加入0.2％刚果红溶液染色４h，具有分解果胶能力的菌落周围便会出现绛红色水解圈。 分离内肽酶产生菌时，除了用酪蛋白外，还可以用吲羟乙酸脂为底物加到分离培养基内，产生蛋白酶的菌落由于水解吲羟乙酸脂为3-吲羟吲哚，后者能氧化生成蓝色产物，根据呈色圈便可选出平板上产蛋白酶的菌落。 水解蛋白质肽键的一类酶的总称。按其水解多肽的方式，可以将其分为内肽酶和外肽酶两类。 蛋白酶 淀粉酶 一般作用于可溶性淀粉、直链淀粉、糖元等α-1，4-葡聚糖，水解α-1，4-糖苷键的酶。根据酶水解产物异构类型的不同可分为α-淀粉酶与β-淀粉酶。 （3） 透明圈法 在固体培养基中渗入溶解性差、可被特定菌利用的营养成分，造成浑浊、不透明的培养基背景。将待筛选在菌落周围就会形成透明圈，透明圈的大小反映了菌落利用此物质的能力。该法在分离水解酶产生菌时采用较多，如脂肪酶、淀粉酶、蛋白酶、核酸酶产生菌时，培养基以淀粉为唯一碳源。要分离核酸水解酶产生菌，可用双层平板法，首先在普通平板培养基上把样品悬浮液涂抹培养，等长出菌落后覆盖一层营养琼脂，内含3%酵母RNA，0.7%琼脂及0.1mol /L EDTA，pH7.0，于42°C左右培养2~4h，四周产生透明圈的菌落，即为核酸分解酶产生菌。 在分离某种产生有机酸的菌株时，也通常采用透明圈法进行筛选。在选择性培养基中加入碳酸钙，使平板呈混浊状，将样品悬浮液涂抹到平板上进行培养，由于产酸菌能够把菌落周围的碳酸钙水解，形成清晰的透明圈，可以轻易地鉴别出来。 （4） 生长圈法 利用一些有特别营养要求的微生物作为工具菌，若待分离的菌在缺乏上述营养物的条件下，能合成该营养物，或能分泌酶将该营养物的