紫外可见光谱光度计.ppt

* （二）选择狭缝宽度 直接影响测定的灵敏度和工作曲线的线形范围。宽，则单色性变差，测定灵敏度降低（?变小）、工作曲线偏离比尔定律、吸收光谱的精细结构消失；窄，光通量小，影响测定的准确度。一般以减小狭缝宽度，吸光度不再增加为准，约吸收峰半宽度的十分之一。 * （三）读数范围 A 0.2～0.8 （四）参比溶液 * 在分光光度法中，常使用参比溶液（reference solution）或称空白溶液（blank solution），其作用是调节吸光度零点、抵消吸收池和溶剂对入射光的影响、抵消试剂（包括显色剂）或样品基体所引起的干扰。正确选用空白溶液，对提高分析的准确度非常重要。常用的参比有： * 溶剂空白 当溶液中只有待测组分有吸收，试剂（包括显色剂）和样品中的其他成分均无吸收时，可用溶剂作空白溶液，简称溶剂空白。 * 试剂空白 显色剂或其它试剂有吸收，按显色反应相同的条件，不加样品，同样加入各种试剂和溶剂作为空白溶液，称为试剂空白。 * 样品空白 样品基体有色，显色剂与样品基体不显色。按显色反应相同的条件，取同样量的样品溶液，不加显色剂，作为空白溶液，称为样品空白。这种空白适用于样品溶液中有吸收干扰的共存组分，且显色剂无吸收的情况。 * 平行操作空白 为了抵消分析过程中引入干扰物的干扰，可用不含待测组分的试液或溶剂或纯水按照与待测样品相同条件平行操作，此称为平行操作空白。这种空白常被当作一个样品溶液来处理，所测得值称为空白值。最后结果应从样品测得值中减去此空白值。 * 第七节 分光光度法的误差来源及其消除 * 一、偏离L—B law引起的误差 根据Beer定律，当液层厚度一定时，测得的吸光度与吸光物质的浓度之间应为线性关系，且直线过原点。 当A—c直线发生弯曲 或不通过原点时，则 称为偏离Beer定律。 造成偏离的原因很多， 主要原因如下： * 3.偏离朗伯—比耳定律的原因 标准曲线法测定未知溶液的浓度时，发现：标准曲线常发生弯曲（尤其当溶液浓度较高时），这种现象称为对朗伯—比耳定律的偏离。 引起这种偏离的因素（两大类） （1）物理性因素，即仪器的非理想引起的； （2）化学性因素。 * （1）物理性因素 难以获得真正的纯单色光。 朗—比耳定律的前提条件之一是入射光为单色光。 分光光度计只能获得近乎单色的狭窄光带。复合光可导致对朗伯—比耳定律的正或负偏离。 非单色光、杂散光、非平行入射光都会引起对朗伯—比耳定律的偏离，最主要的是非单色光作为入射光引起的偏离。 * (2) 化学性因素 ? 朗—比耳定律的假定：所有的吸光质点之间不发生相互作用；假定只有在稀溶液(c10-2mol/L)时才基本符合。 当溶液浓度c 10 －2 mol/L 时，吸光质点间可能发生缔合等相互作用，直接影响了对光的吸收。 故：朗伯—比耳定律只适用于稀溶液。 ? 溶液中存在着离解、聚合、互变异构、配合物的形成等化学平衡时。使吸光质点的浓度发生变化，影响吸光度。 例： 铬酸盐或重铬酸盐溶液中存在下列平衡： CrO42- ＋2H＋ = Cr2O72- ＋H2O 溶液中CrO42-、 Cr2O72-的颜色不同，吸光性质也不相同，故此时溶液pH 对测定有重要影响。 * 3. 杂质的影响 当溶液中的杂质在测定波长处有吸收时，测得的吸光度—浓度直线往往不过原点。对于这种情况必须重新选择测定波长或采用其它的方法消除干扰。当杂质的干扰较小时，可通过选择参比溶液消除。 * 4. 光散射的影响 当试样为胶体、乳浊液或有悬浮颗粒存在时，入射光通过溶液，有一部分光因散射而损失，使吸光度增大，导致Beer定律的偏离。 * 二、光度误差 在不同的吸光度范围内读数，可引入不同程度的误差，这种误差通常以单位百分透光度引起的浓度相对误差来表示，称为光度误差photometric error * 由公式可知，测定结果的相对误差与透光度及?T有关，?T为仪器测得透光度T的随机误差，在仪器一定时，可基本看作常数，这时，测定结果的相对误差与透光度读数之间的关系如图 * 由图可见，吸光度太大或 太小，测定结果的相对误 差都较大，透光度在约 80%～10%，即吸光度在 0.2～0.8范围内，测定结 果的相对误差较小，当 透光度为36.8%，及吸光 度为0.434，测定结果的相对误差最小。 * 第八节 提高分析灵敏度和准确度的方法 一、三元配合物和胶束增溶分光光度法 * 1. 三元配合物 由三个组分所形成的配合物。特点：灵敏度高、选择性好和稳定。因而