牛津杯法测定蛋白酶活性解读.pptVIP

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2016-06-17 发布于湖北
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牛津杯法测定蛋白酶活性解读.ppt

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牛津杯法蛋白酶活性【目的】 1.了解用杯碟法测定蛋白酶活性的原理。 2.掌握蛋白酶活性测定的具体操作步骤与方法。牛津杯牛津小杯[不锈钢小管，内径（6+0.1）mm，外径（8+0.1）mm，高（10+0.1）mm] 牛津杯法【概述】本实验采用国际上最常用的杯碟扩散法来测定蛋白酶活性。测定时，将规格完全一致的不锈钢小管（即牛津小杯）置于含脱脂奶粉的琼脂平板上，并在牛津小杯中加入已知浓度的标准蛋白酶溶液和未知浓度的蛋白酶发酵液滤液。于是，蛋白酶就自牛津小杯处向平板四周扩散，在抑菌浓度所达范围内敏感菌的生长被抑制而出现透明圈。在一定的范围内，蛋白酶浓度的对数值与透明圈直径呈线性关系。因此，只要将被测样品与标准样品的透明圈直径进行比较，就可在标准曲线上查得未知样品的抗生素效价值，为科学实验或临床应用提供参考依据。步骤：（1）倒培养基：取无菌培养皿16套，每皿移入20ml牛肉膏蛋白胨底层琼脂培养基，置水平待凝备用。（2）放牛津小杯：待充分凝固后，在每个琼脂板上轻轻放置4支牛津小杯，其间距应相等，如图所示：放置牛津杯准确定量培养皿盖陶瓦片脱脂奶粉培养基及培养条件牛肉膏蛋白胨培养基的配方：（300ml配方）牛肉膏 0.9g、蛋白胨 3.0g、NaCl 1.5g、琼脂 6.0g、水 300ml、脱脂奶粉6g ； pH 7．4—7．6 30℃培养发酵上清液制备取发酵液，离心机3000转每分钟，30分钟离心即得上清液 * *