第三章紫外可见分子荧光仪器分析详解.ppt

　第三章 紫外及可见吸收光谱法 　　　Ultraviolet and Visible[UV-Vis] 　　　　　　Spectrophotometry 附：分子荧光和化学发光简介 方法特点 用于无机物和有机物的定量分析，也可以进行有机物的定性及结构分析 较高的灵敏度（10-4～10-7g·mL-1）和较高准确度 仪器操作简单快速 本章讨论内容 　　　讨论光的吸收定律，主要介绍紫外 及可见吸收法的应用，扼要介绍紫外及可 见分光光度计和实验技术． 3-1 电磁辐射的选择吸收 一　物质的颜色 　　　当光照射到物体上，光与物质发生相互作用，产生反射、散射、吸收或透射，对于均匀物体，光的散射可忽略． 　　　一束光通过某一有色溶液，一些波长的光被溶液吸收，另一些波长的光则透过．透过光或反射光刺激人眼而使人感觉到颜色存在． 可见光：400~750nm 溶液的颜色由透射光波长决定 物质呈现的颜色是物质对不同波长的光选择必性吸收的结果．如CuSO4溶液，吸收白光(复合光)中的黄光而呈蓝色． 复合光：一束具有多种波长的光 　　　白光是一种复合光，它是由红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等各颜色按一定比例混合而成的． 单色光：一束具有一种波长的光 分子吸收光谱的产生 在分子中，除了电子相对于原子核的运动外，还有核间相对位移引起的振动和转动．这三种运动能量都是量子化的，并对应有一定能级．下图为分子的能级示意图． 　　　图中A和B表示不同能量的电子能级．在每一电子能级上有许多间距较小的振动能级，在每一振动能级上又有许多更小的转动能级． 若用△E电子、 △ E振动、 △ E转动分别表示电子能级、振动能级转动能级差，即有△ E电子? △ E振动? △ E转动．处在同一电子能级的分子，可能因其振动能量不同，而处在不同的振动能级上．当分子处在同一电子能级和同一振动能级时，它的能量还会因转动能量不同，而处在不同的转动能级上．所以分子的总能量可以认为是这三种能量的总和： 　　 E分子 = E电子 + E振动 + E转动 二 吸收的本质－选择性 当入射光子的能量 等于吸光物质的基态和激发态能量之差时才会被吸收． 由于物质的分子（或离子）只有有限数目的量子化能级，所以物质对辐射的吸收是有选择性的． 被激发的粒子在10-8s后又回到基态，并以热的形式或荧光等形式释放能量． 与光子碰撞发生能量转移 　M + hv M* 基态　　　 激发态 　由于分子中的量子化能级是有限的，不同的物质微粒由于结构不同而具有不同的量子化能级，能级差不同，因此物质对光的吸收具有选择性． 三 吸收曲线 １定义： 　　　将不同波长的光透过过某一固定浓度和厚度的有色溶液，测量每一波长下对光吸收程度，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，这种图谱称为该物质的吸收曲线． 　　　描述了物质对不同波长光的吸收能力． ２特征 不同浓度的同一物质，在吸收峰附近，吸光度随浓度增加而增大，但最大吸收波长不变． 在最大吸收波长处测定，灵敏度最高． 吸收曲线是光度法中选择测定波长的重要依据． 　　KMnO4溶液的最大吸收波长为525nm, 吸收黄绿色的光，呈现紫红色． 3 分子吸收光谱类型 根据吸收电磁波的范围不同，可将分子吸收光谱分为远红外光谱、红外光谱及紫外、可见光谱三类． 3-2 光的吸收定律 一、朗伯-比尔定律 １朗伯定律 　　-dI/I=K’db ２比尔定律 　　 光的吸收与溶液中吸光物质的浓度有关． 　　 朗伯定律中的比例常数与吸光物质的浓度成正比． ３朗伯－比尔定律 　　lgI0/I=kbc A=kbc k与物质的性质、入射光的波长及温度等因素有关． ４吸光度与透光度的关系 　　T=I/I0, A=lgI0/I A= –lgT 二 吸光系数和摩尔吸光系数 １吸光系数(a) 当c以g·L-1, b以cm表示时，常数K以a表示，称为吸光系数， 单位为L·g-1·cm-1， 此时吸收定律为： A=abc ２摩尔吸光系数(ε) 　　　浓度c用mol·L-1，液层厚度b以cm为单位时，则K用另ε来表示，ε称为摩尔吸光系数，其单位为L·mol-1·cm-1, 摩尔吸光系数表示物质浓度为1mol·L-1，液层厚度为1cm时，溶液的吸光度． 此时，吸收定律为 　　　　A=εbc 显然，不能直接取1m