4-3 抗体 免疫学.pptVIP

第五节 人工制备抗体 一、多克隆抗体 二、单克隆抗体 三、基因工程抗体 抗血清（antiserum） 机体经特定抗原免疫后含特定抗体的血清。 治疗：用抗血清治疗被剧毒蛇咬伤的人员；抗白喉抗血清治疗白喉病。 预防：研究人员、消防人员及战斗人员预先注射抗破伤风抗体。 抗血清制备的目的 1、被动免疫预防和治疗 2、免疫学诊断及鉴定试剂 如抗甲型肝炎病毒表面抗原Ab、抗艾滋病毒抗血清等。 E.coli、Bt、根瘤菌等的标准抗血清，血型鉴定用的抗血清。 a b c A B C Ag 2 3 4 1 ------含多个抗原表位的抗原免疫动物，可刺激体内多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的抗体的混合物 多克隆抗体（Polyclonal antibody, pAb） B1 B4 B3 B2 B1 B1 B1 B1 B2 B2 B2 B2 B3 B3 B3 B3 B4 B4 B4 B4 羊常用于较大批量地生产抗体（商品） 马：常用于大批量生产治疗用抗体（商品） 1、常用的免疫动物 兔子（rabbit）：最常用于自制抗体，抗体量较多。（新西兰，大耳白） 一、多克隆抗体 小鼠（mouse）：可用于自制抗体，但抗体量很少。（Balb/c，昆明鼠） 大鼠（rat）：可用于自制抗体，免疫过程要麻醉动物。（Wistar大鼠） 豚鼠（guinea pig）：国外实验室常用 2、抗原剂量选择 兔子（rabbit）： 200μg～1 000μg/次 小鼠（mouse）： 50μg～400μg/次 大鼠（rat）： 100μg～1 000μg/次 3、佐剂的应用 非特异性免疫增强剂，当与抗原一起注射或预先注入机体时，可增强机体对抗原的免疫原性或改变免疫应答类型 佐剂（adjuvant） 无机佐剂：氢氧化铝、明矾等 有机佐剂：卡介苗等 Freund佐剂：弗氏不完全佐剂和弗氏完全佐剂 可溶性抗原？ 4、免疫的基本步骤 (1)、注射途径和位点 口服 肌肉 皮内 皮下 静脉 腹腔 耳后 足掌 背部 淋巴结周围 (2)、基础免疫 (3)、加强免疫 ——首次 ——第2次以后 大量抗原 完全弗式佐剂 + 抗原量1/5～2/5 多次，间隔2-4周 不完全弗式佐剂 + ——加强免疫两次或三次以后的第7天取血 (4)、抗血清效价测定 (5)、制备抗血清 最后一次免疫后7-10天放血 放血放置，凝固，吸取血清 离心 纯化 分装 冻存 多克隆抗体制备 特异性不强 5、制备多克隆抗体的主要局限 交叉反应 纯化相对困难 无法连续生产 抗原A 抗原B “多克隆抗体制备”小结 多克隆抗体（Polyclonal antibody, pAb）：含多个抗原表位的抗原免疫动物，可刺激体内多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的抗体的混合物 基本步骤： 1、常用的免疫动物：马、羊；兔，豚鼠；大鼠，小鼠。 2、抗原剂量选择：50μg～1 000μg/次。 3、佐剂的应用（可溶性抗原）：Freund佐剂。 4、免疫的基本步骤： （1）、注射途径和位点； （2）、基础免疫：首次，大量抗原+完全弗氏佐剂； （3）、加强免疫：第二次以后，间隔多次，少量抗原+不完全弗氏佐剂； （4）、抗血清效价测定：加强免疫两次或三次以后的第7天取血，测定效价； （5）、制备抗血清：最后一次免疫后7-10天放血，静置，吸取血清，离心，纯化，分装，备用。 制备多克隆抗体的主要局限：特异性不强；纯化相对困难；无法连续生产 Ag 2 3 4 1 B1 B4 B3 B2 B1 B1 B1 B1 B2 B2 B2 B2 B3 B3 B3 B3 B4 B4 B4 B4 单克隆抗体：单个B细胞克隆针对一个抗原决定簇所产生的一种均一的抗体。 骨髓瘤细胞：不能合成或分泌Ig，具有在体外长期连续继代的特性。 细胞融合(cell fusion)，是在自发或人工诱导下，两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。 二、单克隆抗体（monoclonal Ab, mAb） 1975年，由Kohler和Milstein建立 1984年，获诺贝尔奖 Georges J.F. K?hler César Milstein 淋巴细胞杂交瘤技术 免疫的淋巴细胞： 具有合成分泌抗体的功能 但不能在体外连续继代生长。 骨髓瘤细胞：不能合成或分泌Ig。 具有在体外长期连续继代的特性。 单克隆抗体技术的原理 杂交瘤细胞：合成抗体、能在体外长期连续传代