12.1-补体检测.pptVIP

* * * * * 第十二章 补体检测 补体性质不稳定，易失活，因此做补体 检测必须用新鲜血清 1、固有成分：C1—C9 2、调节蛋白：I因子、H因子、C1INH 3、补体受体：C1qR、C3aR 一、补体的性质 二、补体的组成 三、补体的激活 活化阶段 效应阶段 识别阶段 功能检测 1、总补体活性的检测 2、单一补体活性的检测 量的检测 单一补体量的测定 功能检测多采用溶血实验 量的检测采用免疫浊度法或单扩法 补体检测 SRBC SRBC SRBC SRBC SRBC 第二节 补体总活性测定 绵羊红细胞与相应的抗体结合后形成致敏羊红细胞，在补体存在的情况下，启动经典激活途径，导致致敏羊红细胞的细胞膜穿孔，释放血红蛋白，从而发生溶血 一、溶血实验原理 CH50曲线 原理：在50%溶血附近，S型曲线最陡，当补体量稍有变动，即可对溶血程度发生很大的影响。故以50%溶血作为终点，较以100%作为溶血终点更敏感。 二、CH50测定方法 1.绵羊红细胞浓度的调整（2％－5％） 2. 溶血素滴定（抗绵羊红细胞抗体，灭活补体） 3. 稀释缓冲液 4. 50%溶血标准管 5. 50%溶血总补体值的计算 CH50(U/ml)=(1/血清用量)*稀释倍数 三、方法评价与临床意义 方法简便、快速，但敏感性低，补体的活性除 与反应体积成反比外，还与反应所用的缓冲液、绵 羊红细胞的数量以及反应温度有关。检测的是补体 经典途径的溶血活性，所得结果反应补体C1－C9等 9种成分的综合水平。 水平下降：严重肝病、营养不良、G 细菌感染 水平升高：心肌梗塞、妊娠、糖尿病、甲状腺炎 第三节 单个补体成分的测定 常作为单个补体成分检测的指标： C3、C4、C1q、B因子和C1酯酶抑制物等 测定方法 免疫溶血法 免疫化学法 自动化免疫散射比浊法 定义：根据补体参与抗体介导溶细胞作用的 级联效应特征建立的单一补体成分检测法 指示系统：绵羊红细胞和康绵羊红细胞的抗体 参照体系：缺乏某种补体成分的血清为参照 结果判断 一、免疫溶血法 方法评价：绵羊红细胞作为抗原参与的溶血反应不能反映参与旁路和MBL途径识别、活化阶段的补体成分是否存在。快速、简便，敏感性低，且不能定量 免疫溶血法常用于C2、C3、C4、C5、C6等补体成分的检测。其中以C3、C4两成分检测更为常见。 一、免疫溶血法 二、免疫化学法 1.单向免疫扩散 2.火箭免疫电泳 3.透射比浊法 4.散射比浊法 前两种方法:手工操作繁琐、耗时长、影响因素多、结果重复性差，已趋于淘汰 后两种方法：通过仪器对补体的C3、C4、B因子等单个成分进行自动化测定 第四节 补体结合试验 (complement fixation test，CFT ) 一、原理 反应分两阶段进行： 第一阶段 先加入检测系统及补体，让其有优先结合的机会 第二阶段 加入致敏绵羊红细胞，检测补体的存在与否 反应不发生溶血，待测 物存在，试验结果阳性 反应发生溶血，证明待测 物不存在，试验结果阴性 二、试验方法 补体结合实验中各成分用量之间必须有适当 的比例，才可以避免假阳性或假阴性结果。因此，除绵羊红细胞浓度固定在2%-5%，溶血素用量2单位外，其他成分均需事先滴定其单位，配制成特定的浓度，以保证结果的可靠性 正式试验 实验过程 稀释和处理后的标本与已知抗原或抗体、不同含量的补体温育，最后与指示系统共育 结果判断 首先观察对照管 阴性对照管:溶血 阳性对照管:不溶血 抗体或抗原对照管:完全溶血 待检血清对照管（不加入血清）:完全溶血 绵羊红细胞对照管:不出现自发性溶血 三、方法评价 优点： 1、既可以检测抗原，又可以检测抗体 2、敏感性、特异性高 3、结果判断明显且客观，无需特殊仪器 缺点： 1、参与反应的物质多，影响因素也多 2、操作繁琐且要求严格，易发生失误 * * * * * * * * * * * * * * * * *