体外技术解决方案.ppt

定义 以放射性核素或其他非放射性物质标记的配体(Ligand)为示踪剂，以配体和结合体的结合反应为基础，在试管内进行的微量生物活性物质的检测技术。 体外分析技术是结合了放射性核素的高灵敏度和特异性结合反应的高特异性的一种超微量分析技术，具有灵敏度高、特异性强、精密度好、应用面广、方法简便等优点。 发展 1956年Berson和他的同事们偶然地观察到131I标记的胰岛素与胰岛素抗体的结合与体系中存在的非标记胰岛素的量呈一定的相关关系，而建立了放射免疫分析法，对医学的发展起到了划时代的推动作用，于1977年获得诺贝尔医学奖。 几乎是在同一时期，Ekins和Murphy用自然存在在血液里的激素结合球蛋白（hormone-binding globulins）建立了竞争性蛋白结合分析方法(competitive protein binding assays, CPBA)，测定甲状腺素(T4)和皮质激素。 近年来的主要优势包括多种技术的互相渗透，自动化程度的提高等。例如将酶免疫分析技术与荧光技术或化学发光技术结合，建立的荧光酶免疫分析及化学发光酶免疫分析，可极大地提高灵敏度，增大检测范围。 在时间分辨荧光免疫分析( TRFIA)等分析法中应用新技术实现多个待测物同时检测。 结合反应动力学规律 遵守可逆反应的质量作用定律： k1, v1 [R]+[L] [RL] k2, v2 放射性测量技术 酶定量技术 化学发光定量技术 荧光定量技术 特异性结合反应： 抗原--抗体的免疫结合反应； 配基--受体的结合反应； 底物--催化酶之间的酶促反应； 结合体： 抗原--抗体； 激素--激素结合球蛋白； 受体--配体； 放射免疫分析 radioimmunoassay, RIA 一、RIA的基本原理 （一）竞争抑制结合反应： 放射免疫分析是在体外条件下，由足量的非标记抗原（Ag）与定量的标记抗原（*Ag）对限量的特异性抗体（Ab）的竞争抑制结合反应。 基本原理 （二）剂量反应曲线：标准曲线 标记物与被测物之间的函数关系可以用剂量反应曲线来表示。剂量反应曲线是用一系列标准抗原反应而绘制出来的，所以又叫标准曲线。 标准抗原(标准品)是厂家在试剂盒中提供的已知剂量的非标记抗原。 标准曲线的绘制方法 用一系列已知浓度的标准抗原和一定量的标记抗原在一定条件下同限量的特异性抗体进行反应； 在反应达到平衡后，利用适当的分离方法分离B和F； 分别测量B和F的放射性； 用反应变量（如B/F）作为纵坐标，反应剂量作为横坐标（即一系列标准抗原）作一条曲线，就得到不同浓度的标准抗原对反应变量的竞争抑制曲线，这就是剂量反应曲线。 未知样品的测量 优缺点比较 临床应用 癌抗原CA125属于一种与上皮性卵巢癌相关的高分子糖蛋白，表达于胚胎体腔上皮组织，存在于上皮性卵巢癌组织和病人的血清中。加热至100°C时CA125的活性被破坏。 * * 人附睾上皮分泌蛋白4（HE4） 癌抗原CA125属于一种与上皮性卵巢癌相关的高分子糖蛋白，表达于胚胎体腔上皮组织，存在于上皮性卵巢癌组织和病人的血清中。 CA125主要用于辅助诊断恶性浆液性卵巢癌，上皮性卵巢癌，同时也是卵巢癌术后、化疗后疗效观察的指标。应持续动态的观察。 人附睾上皮分泌蛋白4（HE4） 鳞状细胞癌抗原（SCCA）是一组属于丝氨酸/半胱氨酸蛋白酶抑制物家族的糖蛋白，分子量约为45KDa。SCCA由两组高度同源而生物学截然不同的基因产物组成-SCCA1和SCCA2。 鳞状细胞癌抗原（SCCA） 人附睾上皮分泌蛋白4（HE4） （2）健康人群中的鳞状细胞恶性肿瘤的早期筛查。 （1）子宫颈癌、肺癌、食道癌、头颈部肿瘤和外阴部肿瘤的诊断、手术或放化疗前后的疗效观察及复发预测。 人附睾上皮分泌蛋白4（HE4） CYFRA21-1是由抗细胞角蛋白19片断的单克隆抗体BM9-21及Ks19-1所证实的抗原，是检测非小细胞肺癌的首选肿瘤标志物。此外，CYFRA21-1的浓度升高也可见于乳腺癌、食管癌和头颈癌等。 前列腺特异性抗原（PSA） PSA是前列腺的特异性标记物 属于器官特异性抗原，不具备肿瘤特异性 PSA属于酶类肿瘤标记物，具有糜蛋白酶 样和胰蛋白酶的活性 PSA在正常男性含量小于4?g/L 游离PSA