2015 北京工业大学 细胞生物学(3章 技术).pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * （三）扫描隧道显微镜scanning tunneling microscope，STM 原理：根据隧道效应设计，当原子尺度的针尖在不到一个纳米的高度上扫描样品时，此处电子云重叠，外加一电压（2mV~2V），针尖与样品之间形成隧道电流。电流强度与针尖和样品间的距离有函数关系，将扫描过程中电流的变化转换为图像，即可显示出原子水平的凹凸形态。 分辨率：横向为0.1~0.2nm，纵向可达0.01nm。 用途：三态（固态、液态和气态）物质均可进行观察。 扫描隧道显微镜原理 引自http://www.iap.tuwien.ac.at STM image of a DNA molecule 三、显微操作技术micromanipulation technique 是在倒置显微镜下利用显微操作器进行细胞或早期胚胎操作的一种方法。 包括细胞核移植、显微注射、嵌合体技术、胚胎移植以及显微切割等。 细胞核移植技术已有几十年的历史，1952 年，Briggs和King等将不同阶段的蛙胚细胞核注入去核的蛙卵，构建核移植胚。Gordon（1962）证明原肠胚以后的细胞核移植能发育到成体。1997年，Wilmut等克隆了绵羊Dolly。 显微操作仪 转基因显微操作过程 第二节 生物化学技术 Step-by-step procedure for the purification of organelles by differential centrifugation. Column chromatography SDS polyacrylamide-gel electrophoresis (SDS). Two-dimensional polyacrylamide-gel electrophoresis Electron-microscopic autoradiography 第三节 细胞培养与细胞工程 一、细胞培养 （一）动物细胞培养 群体培养（mass culture）：将含有一定数量细胞的悬液置于培养瓶中，让细胞贴壁生长，汇合（confluence）后形成均匀的单细胞层； 克隆培养（clonal culture）：培养高度稀释的细胞悬液，细胞贴壁生长，每一个细胞形成一个细胞集落，称为克隆。 群体培养（左）和克隆培养（右） 原代培养 （primary culture）：即：培养来自动物机体的细胞群。将细胞转移到新的容器中培养称为传代或传代培养（passage），每代细胞分裂约3-6次。 细胞系（cell line）：原代培养细胞成功传代即为细胞系。 细胞株（cell strain）：从培养细胞中筛选出的具有特定性质或标志的细胞群。 克隆（clone）：亦称无性系。指由同一个祖先细胞通过有丝分裂产生的遗传性状一致的细胞群。 （二）植物细胞培养 原生质体培养：培养脱壁后的细胞，特点： ①比较容易摄取外来的遗传物质，如DNA； ②便于进行细胞融合，形成杂交细胞； ③适宜条件下可产生细胞壁，经诱导分化成完整植株。 单倍体培养：通过花药或花粉培养可获得单倍体植株。 二、细胞工程 通过培养和介导，两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程称为细胞融合（cell fusion）或细胞杂交。 同核体：相同基因型的细胞融合而成。 异核体：不同基因型的细胞融合而成。 诱发融合：异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融合。 诱导细胞融合的方法：生物方法（仙台病毒、副流感病毒和新城鸡瘟病毒 ）、化学方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（电击和激光）。 Preparation of hybridomas that secrete monoclonal antibodies against a particular antigen (X). Monoclonal Antibodies 几种模式生物 * * * * * * * * * * * Chapter 3、Techniques in Cell Biology 第一节 形态结构观察技术(Microscope Technology) 一、光学显微镜 (Light Microscopy) 二、电子显微镜 (Electron Microscopy) 三、显微操作技术(Microscope manipulation ) 第二节 生物化学技术 第三节 细胞培养与细胞工程(Cell culture and Cell Engineering) 第一节 显微技术 光学显微镜：以可见光（或紫外线）为光源。 电子显微镜：以电子束为光源。 （一）普通光学显微镜D=0.61λ/ｎsin（α/2） 普通光线的波长为400~700nm， 光镜分