三酶促反应动力学.ppt

第三节 酶促反应动力学 内容 一、引言 二、反应级数和速度常数 三、单底物酶促反应动力学 四、多底物酶促反应动力学 五、酶催化反应的抑制动力学 六、影响酶催化反应的因素 一、引言 酶催化动力学主要是研究各种因素对酶促反应速度的影响、酶促反应的规律及反应历程。 影响酶促反应速度的因素包括[S]、[E]、[P]、[I]、[A]、pH和温度等。 阐明反应机理 计算反应时间、最佳反应浓度，设计合理反应器 二、反应级数和速度常数 反应级数 V=[A]m[B]n m+n 2. 零级反应: 反应速度与底物的浓度无关。当[S]大大高于[E]时，可认为是零级反应。 3. 一级反应 反应速度与底物浓度成正比（单底物反应）,当[E] 〉〉[S]时为一级反应。 4. 二级反应 反应速度与两个反应物的浓度成正比 两个相同的反应物反应生成产物（2S → P） 两个不同的反应物反应生成产物（A＋B → P）。 2S → P A＋B → P [A] = [B]，与第一种情况的推导和结果相同。 [A] 〉〉[B]，反应速度只与[B]成正比，其动力学方程式与一级反应的相同。 这种反应表面看起来是一级反应，但实际上是二级反应，故称为假一级反应。 三、　单底物酶促反应动力学 反应初速度的测定 中间产物学说 米氏方程 米氏方程的讨论 1.反应初速度的测定 随着酶反应的进行，酶反应速度会逐渐变小。 为了排除底物和产物浓度变化对酶反应速度的影响，采用酶反应的初速度作为衡量的指标。 从理论上来说，作出反应时间对反应物变化量的曲线，从近0处作曲线的切线，则切线的斜率代表初速度。但实际上切线无法作准确。 实际使用的初速度测定方法 1.1.高底物浓度测定法, 零级反应近似法。 必须在无高底物浓度抑制时才适用。 1.2.低底物浓度测定法, 一级反应近似法。 在不同[S]时测定V，以V对[S]作图，直线部分的斜率 为 。在直线部分，[S]乘以 得V。 1.3.使用不同酶量的测定法 在直线范围的酶量和反应时间对应的反应速度可看作初速度。 　 2.1 问题引出 1903年Herry研究反应 蔗糖 葡萄糖+果糖 时发现如下现象： 以酸为催化剂 以蔗糖酶为催化剂 2.2 中间产物学说 1913年Michaelis和Menten 3.1 推导 假设： a；反应过程中酶浓度恒定，[Eo]=[ES]+[E]; b 底物浓度远大于E浓度，所以[S]-[ES]≈[S]； c．在反应初速度条件下，产物P浓度低，不考虑第二步反应 的逆反应。 快速平衡法(k2k-1) 迅速平衡 稳态法 1925年，Briggs和Haldane 酶催化反应的k2很高 Haldane 公式 3.2 Km和Vm的求法 1 ) Lineweaver-Burk作图法（双倒数作图法） ⑴点分布不均匀，集中于1/v轴，不过，此缺点可通过适当选择 [S]克服。 ⑵误差放大。在低[S]时，v很小，本身容易产生误差；而化成1/v与1/[S]后，误差显著放大。 优点：点分布均匀； 缺点：由取1/v，使误差放大，但比较一致 3.3　米氏方程的积分形式 一般： 零级： 一级： 应用： 建立t~X关系 求Km、Vm 4. 米氏方程的讨论 4.1 米氏常数的意义 a.当时 ，Km=[S] Km是酶催化反应速度达到最大反应速度一半时的底物浓度。 b. 不同的酶具有不同Km值，它是酶的一个重要的特征物理常数。测定酶的Km值可以作为鉴别酶的一种手段。 c.同一种酶有几种底物就有几个Km值。 d.Km值表示酶与底物之间的亲和程度：Km值大表示亲和程度小，酶的催化活性低; Km值小表示亲和程度大,酶的催化活性高。 4.2反应规律 a. 当[S]》Km时， ≈Vmax，零级反应，反应速度与底物浓度无关，表明酶的活性中心已全部被底物占据； b. 当[S]《Km时， ≈ ，一级反应，反应速度与底物浓度成正比； c. 当[S]处于两者之间，为混合级反应。 4.3 米氏方程的实际用途 计算V达到Vm的百分率，要达到一定的 ，需要的[S] 确定一定X时的反应时间 寻找天然底物 判断在细胞内酶是否受[S]的调控 判断在细胞中酶催化反应的主要方向 寻找限速步骤 米氏方程的应用范围 单底物单结合位点酶催化反应 酶具有多个结合位点，且相互之间不发生相互作用 多底物反应中，只有一种底物浓度发生变化，其它底物浓度保持不变 适用