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限制性内切酶 限制酶 DNA被限制酶切断后有两个反向互补的“黏性末端”。被同一种限制酶切断的几个DNA具有相同的黏性末端,能够通过互补进行配对。 三、DNA重组技术的基本工具: 1.限制性核酸内切酶----“分子手术刀”: (1)来源: (2)特点: (3)切割后的形式:2种 分别为:黏性末端和平末端 注:限制性酶是一大类酶,不是一种酶。 限制酶大多可以专一性识别双链DNA分子上的某种特定核苷酸序列,限制酶所识别的序列,无论是6个碱基还是4个碱基,都可以找到一条中心轴线,中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称,重复排列的。 基因进入受体细胞的载体 假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样? 作为载体没有切割位点将怎样? 目的基因是否进入受体细胞,你如何察觉? 如果载体对受体细胞有害将怎样?如果不能分离会怎样? 作为载体的必要条件 能自我复制 有切割位点 能与目的基因结合 能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达; 有遗传标记基因 对受体细胞无害、容易分离 比较容易得到 专题1 基因工程 基因工程 抗草甘膦基因 取出 导入 矮牵牛 普通大豆 通俗的说, 将某个基因从A生物体内取出并导入B生物体内,使B产生与A相同或相似性状的技术 基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,并通过体外DNA重组和转基因等技术,赋予生物以新的遗传特性,从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品,由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的,因此又叫DNA重组技术。 基因工程 1.1 DNA重组技术的基本工具 一、教学目标: 1.简述DNA重组技术所需三种基本工具的作用。 2.认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新。 二、教学重点: DNA重组技术所需的三种基本工具的作用。 三、教学难点: 基因工程载体需要具备的条件。 一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 重播 黏性末端和平末端 实例 1: 1、下列关于限制酶的说法正确的是( ) A.限制酶广泛存在于各种生物中,但微生物中少 B.一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 C.不同的限制酶切割DNA后都会形成黏性末端 D.限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氢键 答案:B 将切下来的DNA片段拼接成新的DNA分子,靠什么来完成呢? 二、DNA连接酶——“分子缝合针” 重播 两种连接酶区别: E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 黏性末端 平末端 效率低 DNA连接酶和 DNA聚合酶的异同: DNA连接酶 DNA聚合酶 相同点 化学本质: 形成: 不同点: 连接 模板 蛋白质 磷酸二酯键 片段 单个核苷酸 不需要 要 用什么方法才能将外援基因送入细胞中呢? 三、基因进入受体细胞的载体-“分子运输车” 能复制并带着插入的目的基因一起复制 有切割位点 有标记基因的存在,将来可用含青霉素的培养基鉴别。 本节内容小结: 1.知识梳理: DNA重组技术的基本工具: ①限制酶(分子手术刀):识别特定的核苷酸序列并切割两核苷酸之间的磷酸二酯键; ②DNA连接酶(分子缝合针):连接两核苷酸之间的磷酸二酯键; ③基因进入受体细胞的载体(分子运输车):最常用的是细菌质粒,还有λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。 1、基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中,不进行碱基互补配对的步骤是 ( ) A、人工合成目的基因 B、目的基因与运载体结合 C、将目的基因导入受体细胞 D、目的基因的检测和表达 C 练习 2、下列黏性末端属于同种内切酶切割而成的 是( ) A、①② B、①③ C、①④ D、②③ T C G A G C T T A A A G G T T C C A A G C T T C A G A A T T C G ③ ① ② ④ 3、下列哪一种酶是基因工程的工具酶( ) A、DNA连接酶 B、DNA酶 C、RNA酶 D、运载体 选我 A 选我 A 记住了 练习 4、在基因工程中,切割运载体和含有目的基因的DNA片段,需使用( ) 同种限制酶 B. 两种限制酶 同种连接酶 D. 两
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