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量子点的大小和PEI包被层对人类间充质干细胞基因转染效率的影响 目 录录 目的及背景 目的：提高细胞对量子点的吸收能力和基因转染效率。 背景：纳米材料（NPs）应用于基因治疗和生物成像。 NPs可经内吞作用进入细胞，也可通过细胞分泌释放 到细胞外，因此需要对NPs进行必要的表面修饰。 量子点（QD NPs）因为其优越的检测能力和稳定性已 经成为潜在的单分子细胞成像标记物。 如何改变量子点表面特性是解决问题的关键。 方法及步骤 实验材料： Linear polyethylenimine (PEI, 25 kDa)， 琼脂糖,甘氨酸,氯化钾，氯化钠， TEMED (N,N,N′,N′-Tetramethylethylenediamine), 2-mercaptoethanol, 过硫酸铵,单克隆抗体,anti-β -actin溴化乙锭(EtBr),4′,6′-diamidine-2′- phenylindole盐酸盐(DAPI)、二甲亚砜(DMSO)和氯仿 羧基化量子点525，605，655.氨基化量子点655. 绿色荧光蛋白(GFP)抗体和红色荧光蛋白(RFP)抗体 方法及步骤 合成QD NPs： PEI (5 mg)溶解在HEPES-buffered生理盐水1 h 60°C。 PEI溶液通过一个0.2μm注射过滤器得到PEI过滤液。 量子点(0 - 2 nmol /mL)和PEI(5 μg /mL)与去离子水(200 μl)混合产生QD NPs溶液。 最后，将溶液加入到溶解于不同QDs浓度的质粒DNA溶液中缓慢搅拌。 结果及分析 在这项研究中,使用了几种类型的量子点,包括QD525 (5 nm), QD565 (10 nm), QD605 (15 nm), and QD655 (20 nm),他们分别表现出独特的颜色如绿色、黄色、红色和粉红色。 根据粒径分布，它们还表现出特定的光谱。 这些独特的颜色会让基因转染的检测更加灵敏。 方法及步骤 结果及分析 随着粒径增大，羧基更多的暴露在外，便于与质粒DNA结合。 适当的纳米材料粒径（100–200 nm）便于进入细胞。 通过凝胶电泳确定QD与PEI最佳的比例。 结果及分析 体外稳定性测试。 结论为在pH=7 的条件下，QD NPs可长期稳定存在。 在pH=4和pH=9的条件下的不稳定性，猜测是破坏了QD NPs上的羧基和PEI的静电相互作用。 这个结果标明，人体偏中性的pH条件是有利于它们存在的。 结果及分析 人类间充质干细胞（hMSCs）对QD655 NPs的摄取率最高。 细胞吸收NPs是高度依赖于NPs的大小。 细胞摄取多联QDs的NPs范围在150到200 nm(QD605和QD655 NPs)时，在对比较小的NPs摄取效率更快。 QD NPs只能通过细胞的内吞作用进入hMSCs。 结果及分析 对转染效率的评价。 由于PEI细胞毒性的影响，相对量较少的PEI外壳对细胞的生存能力影响较少，从而影响转染效率。 相对更多的QDs有利于与质粒DNA的结合。 在合适的粒径范围内，QDs的粒径越大转染效率越高。 结果及分析 移植小鼠体内后，QD NPs表现出预期的颜色源于它们的光学性质。 基因转染hMSCs后，转染QD655 NPs表达的荧光强度高于QD525 NPs约60%。 QD NPs的转染效率取决于它们的大小。 结论与展望 结论：QD NPs的大小可以影响hMSCs吸收和转染。最大的QD NPs,QD655 NP相比其他大小的QD NPs(QD525、QD565 和QD605)显示出最好的基因传递效率。 展望：QD NPs不仅在基因治疗中有着不俗的潜力，在活体移 植的细胞成像上也有着一定的前景。 * * LOGO 哈传博 2015.04.04 目的及背景 1 方法及步骤 2 结果与分析 3 结论与展望 4 图 1 * * *