金属-多环芳香烃混合物在端足虫体内的毒性以及金属累积和氧化应激相互作用的协同毒力机制.pptVIP

Metal?Polycyclic Aromatic Hydrocarbon Mixture Toxicity in Hyalella azteca. 2. Metal Accumulation and Oxidative Stress as Interactive Co-toxic Mechanisms金属-多环芳香烃混合物在端足虫体内的毒性以及金属累积和氧化应激相互作用的协同毒力机制 主要内容 前言 材料方法 结果与讨论 结论 前言 在海洋和淡水系统中，菲（PHE）和它的氧化/降解产物通常和Cu、Ni、Cd 、V 一起共同污染水体。水体中金属和多环芳香烃（PAH）污染物的毒性作用已被广泛研究，但是它们之间协同毒力作用却不能通过两种应激源毒性作用的简单相加进行评估。 水生系统中存在着种类繁多的对环境变化敏感的无脊椎动物，端足虫通常被当作研究水体毒性的典型生物。 金属和PAHs对水生生物体内活性氧（ROS)稳态和离子平衡调节的影响具有相似之处。它们的共同的急性致命作用机制为：破坏生物半透膜和氧化应激作用。 由于共同暴露在金属和PAHs环境中引起金属的生物积累或ROS改变能增加或减少这些污染物对水体造成的生态风险，因此作者对端足虫体内急性致命作用可加性、金属的生物积累量以及Cu、Ni、Cd 、V与PHE和PHQ结合的二元混合物与ROS产生的关系进行了研究。 材料与方法 试验材料准备： 在25℃下，将1L标准人工培养基中的端足虫放入2L的聚丙烯培养容器中；每周用5mg磨碎的鱼片喂养端足虫3次，在每个星期结束的时候用700和200μm的尼龙网筛将成虫和幼虫分开，分开后将幼虫再次放入装有1L标准人工培养基的聚丙烯培养容器中，温度调为20℃。 试验设计 1、金属积累试验 将培养2-10天的端足虫暴露在固定比例的金属-多环芳香烃混合物中，在标准浓度系列的5个浓度下进行测试。每个处理重复3次，在暴露48h后将存活的端足虫收集起来进行组织分析。只有Cu-PAH和Cd-PAH的试验进行金属积累分析。 试验结束后，从对照、只含金属、金属-PAH混合物处理的所有重复中至少取4个存活的端足虫，分别浸泡在50 μM的EDTA溶液中除去吸附在表面的金属离子，然后转入1.5mL的冷冻管中，在80℃条件下干燥72h。干燥称重后，用160μL 70%HNO3将样品在室温下消化6天，然后再120μL 30%H2O2进一步消化24h。在用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析之前加超纯水使溶液体积为6mL。 金属生物积累的计算方法： 其中： ctb：端足虫体内的金属含量； max：暴露期间内端足虫可积累的最大金属浓度； cw：水中的金属浓度； kw：暴露期间的半饱和常数； cbk：端足虫体内金属浓度的背景值。 2、死亡率和ROS产生试验 试验单一处理：?对照；?只含金属（Cu、Ni、Cd 、V）；?只含PAHs（PHE、PHQ）；④同一浓度的金属-PAH混合物。 试验方法： 将培养2-10天的端足虫在处理之前在21℃下培养24h，然后将10-20只端足虫放入装有300ml溶液中进行18h的暴露处理，每个处理重复3次。暴露处理的过程中，温度为21℃，并进行16/8h的光周期处理。 将存活的端足虫转移到1.5mL的冷冻管中，然后二氯荧光素二乙酸酯(H2DCFDA)染色。H2DCFDA被氧化（如被ROS氧化）后能转变成能发射荧光的二氯荧光素(DCF)。染色完后完后将溶液浓度调至10μM，培养4h后进行荧光测定。 结果与讨论 1、端足虫幼虫组织中Cu和Cd的积累（48h处理后） 细胞膜上的PAHs与端足虫体内Cu的增加无关 2、模型结果总结（与Borgmann和Norwood的研究相比较） p:由于体内金属浓度而引起的死亡率 Cu-only和Cu-PHE的kw值偏高（Borgmann和Norwood的研究结果为18.5μg/g），Cu-PHQ的kw比较正常 3、GLM模型结果总结 4、暴露在Cu-PHE和Cu-PHQ中端足虫的死亡率和ROS荧光 Cu和PHQ有明显的交互作用 5、暴露/不暴露在Cu中的端足虫的荧光图像 暴露在Cu中的端足虫体内产生较多的ROS 结论 PHQ能够增加端足虫体内Cu的含量，在一定程度上解释了 PHQ和Cu的协同致死效应； ROS依赖性机理和金属累积并没有参与协同致死效应。 请老师和各位同学批评指正！ 谢谢！