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第七章 螺旋体 (Spirocha) 夏 春 教授 中国农业大学动物医学院 预防兽医学教研室 本章重点 以猪痢疾密螺旋体、钩端螺旋体为主要内容，病原体的观察方法、培养特性及诊断方法。 概 述 螺旋体是一类细长、柔软、弯曲呈螺旋状、能活泼运动的原核单细胞微生物。 基本结构与细菌类似，有细胞壁、核质、以二分裂繁殖和对抗生素敏感。 根据螺旋数目、大小与规则程度，以及两螺旋间距离，分为5个属。 其中不少是非致病性的。 对人和动物有致病性的有三个属： 疏螺旋体属(Borrelia) 3-10个稀疏而不规则的螺旋，呈波状。 密螺旋体属(Treponema) 有细密而规则的螺旋，数目较多，两端尖。 钩端螺旋体属(Leptospira) 螺旋较密螺旋体更细密而规则，一端或两端弯曲成钩状，故名。其中许多群和型能引起人和动物钩端螺旋体病。 第一节 蛇形螺旋体属（Serpulina） 蛇形螺旋体属是一个新属，包括猪痢蛇形螺旋体和无害蛇形螺旋体。 细胞呈疏松、规则的螺旋形，呈屈曲和蛇形运动或移位运动。 有机营养,厌氧生长。 可呈现微弱或强β溶血。 猪痢蛇形螺旋体 一、生物学特性 1.形态结构及染色特性 本螺旋体形态结构与其属的描述一致，菌体多为2-4个弯曲，两端尖锐。 革兰氏阴性，姬姆萨氏和镀银法均能使其较好着色。 2. 培养特性 严格厌氧，一般厌氧环境不易培养成功，必须使用预先还原的培养基，并置于含的H2(或N2)和CO2(二者比例为80：20)混合气体以及以冷钯为触媒的环境中才能生长。 对培养基要求苛刻，通常使用含10％胎牛(或犊牛或兔)血清或血液的TSB或BHIB培养基。 在TSB血液琼脂上，38℃48-96min可形成扁平、半透明、针尖状、强β溶血性菌落。 3.抗原与免疫性 猪痢疾密螺旋体有两种抗原成分： 脂多糖、蛋白质（特异性）。 该菌有8个血清型。 自然发病猪康复后，可产生相应的抗体，具有一定的保护力。 4. 致病性 常发生于8-14周龄幼猪，引起猪痢疾 （血痢、黑痢、出血性痢疾、粘膜出血性痢） 主要症状是严重粘膜出血性下痢和迅速减重。 特征病变为大肠粘膜发生部液渗出性 (卡他性)、出血性和坏死性炎症。 经口传染，病原传播迅速，发病率较高(约75％)而致死率较低(5％-20％) 。 5. 微生物学检查 直接镜检 (3种方法) 染色镜检： 以病猪的新鲜粪便粘液，或病变结肠粘膜刮取物制成薄涂片，染色镜检。多用姬姆萨氏法染色法。也可用印度墨汁作负染或镀银染色法染色镜检。 相差或暗视野显微镜活体检查： 待检样品与适量生理盐水混合后制成压滴标本片，用相差或暗视野显微镜下镜检。若每个高倍视野中见有2-3个或更多个蛇样运动的较大螺旋体即可确诊。 染色组织切片检查： 将采集的病变肠组织先用10％甲醛缓冲液固定后切片，再用维多利亚蓝染色法染色。镜检时可见螺旋体大量存在组织表面及粘液囊腔内，有时数量多到堆积成网状。 分离培养： 过滤培养法： 将样品作5-10倍稀释，轻度离心，上清用0.8um和0.45um滤膜依次过滤。取滤液直接涂布接种于鲜血琼脂平板上，厌氧培养37-38℃培养3-6d，每隔2d检查1次，当观察到平板上出现β溶血现象时，即可挑取可疑菌落，作成悬滴或压滴标本，用暗视野显微镜检查。 钩端螺旋体（暗视野映光法） 6. 防 治 对猪痢目前尚无可靠或实用的免疫制剂以供预防之用。 普遍采用抗生素和化学药物控制此病. 培育SPF猪，净化猪群是防治本病的主要手段。 第二节 细螺旋体属 (Leptospira) 细螺旋体属成员是一大类纤细、螺旋致密，一端或两端弯曲呈钩状的螺旋体，故常称钩端螺旋体，简称钩体。 大部分营腐生生活，广泛分布于各种水生环境中，无致病性。一部分为寄生性和致病性的螺旋体，可引起人和动物的细螺旋体病。 一、生物学性状 1.形态与染色 螺旋细密、规则，形似细小珍珠排列的细链。一端或两端呈钩状。运动活泼 ,常使菌体呈C、S或8字型 革兰染色阴性，不易着染 Fontana镀银染色法→染成棕褐色 运动活泼 2.培养特性 在致病性螺旋体中钩体比较容易在人工培养生长。但在血液琼脂和其他常规琼脂上不生长。 常用Korthof 培养基含蛋白胨和10%的兔血清。大多数为液体或半固体（0.1%琼脂）。 专性需氧，最佳生长温度为28-30℃。在需氧，pH7.4, 28℃左右培育1-2周，可见液体培养基半透明云雾状生长。 钩体的生化反应不活泼，不分解糖类和蛋白质。能产生过氧化氢酶，有些株能产生溶血素。 3. 抵抗力 热抵抗力弱，60℃1min即死亡。 0.2%来苏、1:2000升汞、1%石炭酸经10~30min被杀灭。 对青霉素、金