放线菌抗生素的发酵及目的产物的提取实验报告.docVIP

放线菌抗生素的发酵及目的产物的提取 实验目的 1、熟悉掌握土壤中分离抗生素及培养方法 2、了解和掌握种子制备和摇瓶发酵技术和方法 3、了解抗生素发酵的一般规律和代谢调控理论? 4、了解小型发酵罐的基本结构 5、熟悉掌握小型发酵罐的使用方法和保养 6.掌握抗生素生物效价测定的原理和方法； 掌握管碟法测定抗生素生物效价相关的操作掌握的基本原理和操作技术 发酵瓶培养基： (淀粉3%,葡萄糖2%, 黄豆饼粉2.5%, 蛋白胨0.5% ,酵母粉0.5%, MgSO4 0.1%,(NH4)2SO4 0.3%,KH2PO4, 0.03%, CaCO3 0.4%, PH 6.0。 (黄豆饼粉 4g, 淀粉10g, 酵母粉0.25 g , 蛋白胨1.5g,MgSO4 0.025 g, CaCO3 0.4g, (NH4)2SO4 0.3 g, α-淀粉酶（105u/ml） 0.01ml. (可溶性淀粉 .0g，NaC 0.05g，KNO3 0.1g, K2HPO4 0.5g，MgSO4.7H2O 0.05g， FeSO4.7H2O 0.01g， 蒸馏100ml，PH 7.4， 牛肉膏蛋白胨 牛肉膏 (5.0g），蛋白胨（10.0g）， NaCl（5g），蒸馏水（1000mL），pH 7.2~7.4 ×1cm2，接种于灭过菌的高氏一号培养基中。? ⑶培养? 将接种好的种子摇瓶于28℃恒温室摇床上，转速为200r/min，培养48小时左右。 ⑷实罐灭菌 1、将冷凝水管路断开，拔下电极，打开罐盖，将发酵培养基装入发酵罐及补料瓶，易产生泡沫的培养基尽量不要超过两升。 2、连接管路：取样管路连接，补料管路连接；空气过滤器用硅胶管与罐盖空气管连接，并用弹簧夹夹紧；排气口与过滤器用硅胶管连接；安装温度电极、pH电极、溶氧电极，pH电极用们帽盖紧电极上端口，溶氧 电极用铝铂纸包裹电极上端口，防止受潮。盖紧其它罐盖接口。 3、提起玻璃罐体及补料瓶放入灭菌锅，盖好牛皮纸，盖好锅盖，确定发酵温度及时间。 4、灭菌结束后，尽快将罐放回原位并尽快通入空气。 ⑸发酵操作 1、将灭菌后的罐体放回原位，连接冷凝水管路，通入冷凝水，连接通气管路，调整通气量至3～5L/min。 2、将温度电极、pH电极、溶氧电极与控制器连接。 3、补料管连接：打开补料蠕动泵防护盖，搬开进出口处的白色管夹，将硅胶管嵌入入口处的管夹并夹紧，用手转动泵头，将硅胶管沿凹槽安装直至出口处，开手动开关约十秒后夹紧出口处管夹，关手动开关；将酒精棉球放在罐盖补料口内，将针头插入并穿透密封盖；打开蠕动泵手动开关，使输液管中充满料液，置于自动状态。 ? ⑹接种? 将培养48小时的摇瓶种子接种于发酵罐中，使用接种圈放置酒精棉点燃，进行无菌接种，接入100ml种子。接种后立即进行第一次取样。 ⑺发酵生产 ⑻发酵过程的测定：? (发酵液状态观察：粘度、颜色、气味、菌丝形态? (发酵中残糖的测定-DNS法： 1.取1.0mg/ml葡萄糖标准溶液，按下表加入试剂。沸水浴加热5min，冷水冷却定容至25ml摇匀，在520nm按波长测吸光度。 编号 葡萄糖标准溶液/ml 水/ml 溶液糖含量/mg DNS试剂/ml 0 0 2 0 1.5 1 0.2 1.8 0.2 1.5 2 0.4 1.6 0.4 1.5 3 0.6 1.4 0.6 1.5 4 0.8 1.2 0.8 1.5 5 1.0 1.0 1.0 1.5 6 1.2 0.8 1.2 1.5 7 1.4 0.6 1.4 1.5 8 1.6 0.4 1.6 1.5 2.取发酵液0.5ml置于50ml容量瓶中，加6mol/l的盐酸溶液2ml，在沸水溶液中加热15min水解，冷水冷却后及时6mol/l氢氧化钠溶液1.8ml，并定容到50ml的总糖水解液。 3.取总糖水解液2ml于25ml比色管中，加入DNS试剂1.5ml沸水浴中加热5min，冷水冷却后定容至25ml摇匀，以空白作对照在520nm波长测吸光度。 (氨基酸氮的测定：甲醛法(陈钧鸣和徐玲娣,1991)。取2ml发酵液滤液于三角瓶内,加蒸馏水10ml,甲基红指示剂2滴,用O.3MHCI调节pH至溶液呈红色,再用0.02858MNaOH溶液调pH至溶液呈橙色(中性),