S-发酵工艺地研究论文.docVIP

2011-2012年第一学期发酵工程学期论文 课题 S-腺苷甲硫氨酸的发酵工艺研究 班级: 10生物1班 组员： 郑颉怡 曾桂芳 温建超 许梓豪 刘俊威 摘要：酿酒酵母LS101发酵生产S-腺苷甲硫氨酸（SAM）的工艺S-腺苷甲硫氨酸发酵的影响。方法：利用酿酒酵母菌株产S-腺苷甲硫氨酸进行种子培养以及种子扩大培养，通过控制变量法得知温度、pH、转速、时间对S-腺苷甲硫氨酸发酵的影响。结果：酿酒酵母LS101发酵S-腺苷甲硫氨酸的最适温度为25℃左右，最适pH为5.0，最适转速为250r/min及培养的最适时间为96h。结论：得出最适于S-腺苷甲硫氨酸的生产因素条件，更好的提高S-腺苷甲硫氨酸的产量。 关键词：酿酒酵母LS101S-腺苷甲硫氨酸（SAM） 1 二、材料及仪器 3 （一）、材料 3 （二）、仪器 3 三、工艺流程 4 第一步 菌株筛选 4 第二步 种子培养与发酵 4 第三步 种子扩大培养 4 第四步 保藏 4 四、影响发酵的因素 5 五、总结 6  二、材料及仪器 （一）、材料 S-腺苷甲硫氨酸高产菌株酿酒酵母LS101蔗糖酵母粉K2HPO4?H2O、MgSO4?7H2O、ZnSO4?7H2O、MnSO4?4-6H2O、8L发酵罐间歇分批补料发酵甘油尿素L-甲硫氨酸少量的磷酸盐和其他无机盐UV-2100型紫外分光光度计（上海尤尼柯仪器有限公司）；Agilent 1100型高效液相色谱仪（美国安捷伦科技公司）；TGL-20B-C高速台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；GBJT-7W型全自动发酵系统（镇江东方生物工程设备技术公司）。 S-腺苷甲硫氨酸目前还停留在实验室发酵的阶段，还没有正式投入到市场大量生产，所以最后一步我们改为了保藏。各个步骤的详细内容如下： 第一步 菌株筛选 酿酒酵母菌株产S-腺苷甲硫氨酸，,通过在实验室检测,最佳发酵条件为：25℃，发酵液初始pH值：5．0，摇床转速：225r／rnin，发酵时间：108h,在该发酵条件下，酿酒酵母菌株A18A，产S-腺苷甲硫氨酸最高量达：2．54g／L 菌株筛选很重要，因为好的酵母菌株能高产率的S-腺苷甲硫氨酸，为后面的试验奠定基础。 第二步 种子培养与发酵 S-腺苷甲硫氨酸种子培养基（/L）的成分是是蔗糖50 g，酵母粉 10 克，磷酸二氢钾 4 g，K2HPO4?3H2O 2.6克，MgSO4?7H2O 0.1克，ZnSO4?7H2O 2.5 mg，MnSO4?4-6H2O 12.5 mg； 以上是S-腺苷甲硫氨酸培养基的成分，按照比例配置完毕后还有注意调整pH值和灭菌。跳蚤pH= 6.0后再高压灭菌，灭菌参数是115 ℃下灭菌20 min；固体培养基在灭菌后再添加2 %的琼脂。 第三步 种子扩大培养 摇瓶及发酵罐培养基（/L）：蔗糖、酵母膏、尿素适量，L-甲硫氨酸 4， 0.2 g，少量的磷酸盐和其他无机盐；pH自然；115 下灭菌20 min。摇瓶及发酵罐培养基 摇瓶及发酵罐培养摇瓶发酵：5 mL种子接入含有100 发酵培养基的500 摇瓶中，温度30 ，220 r/min发酵。发酵罐间歇分批补料发酵：取摇瓶培养的二级种子，按发酵罐工作体积的5 %～10 %接种到8 L全自动控制发酵罐中。调节转速和空气流量控制溶氧在30 ％以上，发酵过程中流加控制pH 5.0左右，培养温度30 ，定时补加蔗糖和L-甲硫氨酸。保藏培养基（/L）：蔗糖20 g，酵母粉10，KH2PO4 4，K2HPO4?H2O 2.6，MgSO4?7H2O 0.1，ZnSO4?7H2O 2.5 mg，MnSO4?4-6H2O 12.5 mg；pH自然；115 下灭菌20 min；保藏菌种时加入20 %～30 %甘油，－20 冷冻保藏。 四、影响发酵的因素 在S-腺苷甲硫氨酸发酵的过程中,有很多因素都会直接影响到菌种的产量,通过我们研究观察,我们发现对产量影响的因素有温度.pH、转速和培养时间等。为了达到最高的效率，控制发酵条件就变得尤为重要。 要控制好发酵条件，首先我们就必须知道各因素对发酵的影响，从而才能知道在什么条件下，能达到最高的产率。我们进行了大量的研究，在此前提下，我们获得了各种不同因素影响下S-腺苷甲硫氨酸发酵情况的详细数据。 温度：(图见1-1)酿酒酵母菌株有其适宜的生长温度范围，发酵温度会对菌体生长、酶活性和次生代谢产物的形成产生明显影响.。随发酵温度的升高，发酵液中S-腺苷甲硫氨酸产量和菌体产量明显升高；至25℃ 时，酿酒酵母菌株发酵液中SAM产量和菌体产量最高；继续升高发酵温度，则发酵液中S-腺苷甲硫氨酸产量和菌体产量迅速降低。原理就是温度过低会使酶活性下降，代谢速度降低，代谢产物积累延长