吉林省吉林市长岭县第四中学2014届高三生物一轮复习课件：专题5、6 DNA蛋白质技术.pptVIP

* * 最新考纲 高频考点 1.PCR技术的基本操作和应用 2．蛋白质的提取和分离 3．从生物材料中提取某些特定的成分 1.DNA粗提取的原理、方法和注意事项 2．PCR技术操作及原理 3．蛋白质提取的原理和方法 4．提取芳香油的三种常用方法及适用范围 5．层析法鉴定胡萝卜素时点样的关键 一、多聚酶链式反应扩增DNA片段 1．细胞内DNA复制与PCR技术的比较 细胞内DNA复制 PCR 不 同 点 解旋 在解旋酶作用下边解旋边复制 80～100 ℃高温解旋，双链分开 酶 DNA解旋酶、DNA聚合酶 TaqDNA聚合酶 引物 RNA DNA或RNA 温度 体内温和条件 高温 相 同 点 ①需提供DNA复制的模板 ②四种脱氧核苷酸作原料 ③子链延伸的方向都是从5′端到3′端 ④都需要酶的催化 2.PCR的反应过程 一般要经历三十多次循环，每次循环可分为变性→复性→延伸三步。 3．PCR技术反应过程中控制不同温度的意义 (1)90 ℃以上时变性，双链DNA解聚为单链； (2)50 ℃左右时复性，两种引物与两条单链DNA结合； (3)72 ℃左右时延伸，TaqDNA 聚合酶促使DNA新链的合成。 1．多聚酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。PCR过程一般要经历30多次下述循环：95 ℃条件下使模板DNA变性、解链→55 ℃条件下复性(引物与DNA模板链结合)→72 ℃条件下引物链延伸(形成新的脱氧核苷酸链)。下列有关PCR过程的叙述，不正确的是 (　　) A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键，也可利用解旋酶实现 B．复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成的 C．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、4种核糖核苷酸 D．PCR与细胞内DNA复制相比，其所需要酶的最适温度较高 【解析】　PCR一般要经历30多次循环，每次循环可以分为变性、复性和延伸三步。从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链会与引物Ⅱ结合，进行DNA的延伸。DNA变性(90～96 ℃)：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA。复性(25～65 ℃)：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。延伸(70～75 ℃)：在Taq酶(在72 ℃左右活性最高)的作用下，以dNTP为原料，从引物的5′端向3′端延伸，合成与模板链互补的DNA链。 【答案】　C 二、DNA的粗提取与鉴定 1．基本原理 (1)DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，在0.14 mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低； (2)DNA不溶于酒精溶液； (3)DNA不被蛋白酶所水解； (4)DNA可被二苯胺染成蓝色。 2．方法目的 方法 目的 溶于NaCl溶液中并稀释 ①NaCl浓度为2 mol/L时，DNA溶解，而部分蛋白质发生盐析而生成沉淀，通过过滤可除去部分蛋白质及不溶于NaCl溶液的杂质 ②当NaCl溶液稀释至0.14 mol/L时，DNA析出，过滤可除去溶于NaCl中的部分蛋白质和其他杂质 加入嫩肉粉 嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解蛋白质 加入冷却酒精(95%) DNA析出，除去溶于酒精的蛋白质 加入二苯胺，并沸水浴 鉴定DNA (1)哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核，也没有DNA，不适于作DNA提取的材料，但却是提取血红蛋白的理想材料。 (2)实验过程中两次用到蒸馏水，第一次目的是使成熟的鸡血细胞涨破释放出DNA，第二次目的是稀释NaCl溶液。 2．(2010年青岛模拟)下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是 (　　) A．氯化钠的浓度越低，DNA的溶解度越大 B．人的血液不可代替鸡血进行该实验 C．柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂 D．利用DNA易溶于酒精的特点可除去DNA中的部分杂质 【解析】　人是高等哺乳动物，其成熟的红细胞中没有细胞核不能进行该实验。A项NaCl溶液浓度在小于0.14 mol/L时，溶液的浓度越低，对DNA的溶解度越大是正确的，没有前提条件这种说法是错误的；柠檬酸钠的作用是抗凝血；DNA不能溶于酒精中，所以B项是对的。 【答案】　B 3．向溶有DNA的2 mol/L的NaCl溶液中不断加入蒸馏水，在这个过程中DNA和杂质蛋白质的溶解度变化情况分别是 (　　) A．减小；减小　　　　　 B．增大；增大 C．先减小后增大；增大 D．减小；增大 【解析】　DNA在NaCl溶液中的溶解情况如右图所示：在向溶有DNA的2 mol/L的NaCl溶液中不断加入蒸馏水时，DNA的溶解度先减少后增大，而蛋白质在高浓度盐溶液中会沉淀，随盐浓度的降低，蛋白质的溶解度升高。 【答案】　C 三、血红蛋白的提取和分离 1．方法及原理 方法